الحصول على معلقات الخلايا من أنسجة دماغ الفأر الإقفارية

خذ أنسجة دماغ الفئران الإقفارية التي تحتوي على خلايا الدماغ والخلايا المناعية المتسللة.

افرم المناديل على مصفاة واشطفها بمحلول عازل.

الطرد المركزي المرشح والتخلص من المادة الطافية.

أعد تعليق الحبيبات في محلول إنزيم هضمي وانقلها إلى أنبوب طرد مركزي دقيق.

احتضان الإنزيمات الهاضمة لتحطيم المصفوفة خارج الخلية ، مما يؤدي إلى فك الخلايا.

قم بتصفية التعليق وشطفه بمحلول احتوائي يحتوي على DNase لإزالة الحمض النووي الملوث.

بعد ذلك ، اغسل بمخزن مؤقت خال من DNase.

الطرد المركزي المرشح والتخلص من المادة الطافية.

إعادة تعليق الخلايا في وسط تدرج الكثافة. ثم انقل المحتويات إلى أنبوب جديد واخلطها. جهاز طرد مركزي لفصل المكونات حسب الكثافة.

قم بإزالة المادة الطافية التي تحتوي على المايلين والحطام.

أعد تعليق الحبيبات في مخزن مؤقت خال من DNase. انقله إلى أنبوب جديد وجهاز طرد مركزي مرة أخرى.

تخلص من المادة الطافية لضمان الإزالة الكافية لوسط تدرج الكثافة.

أخيرا ، أعد تعليق الخلايا في المخزن المؤقت لمزيد من التحليل.

باستخدام نهاية المكبس لحقنة سعة 5 ملليلتر ، اهرسي قطع أنسجة المخ من خلال مصفاة خلية 100 ميكرون ، واشطف المصفاة باستمرار باستخدام HBSS المثلج بالكالسيوم والمغنيسيوم. ثم ضع الأنسجة المتجانسة على الجليد.

عندما تتم معالجة جميع العينات ، قم بتدوير معلقات الخلية. وتخلص بعناية من المواد الطافية أعد ت