JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 3:43 د • July 8th, 2025
خذ حقنة مليئة بالليفودوبا ، وسلائف الدوبامين ، ومثبط تحويل الدوبامين.
حقن هذا الحل في الأنسجة تحت الجلد للفأر المقيد مع مرض باركنسون, يعرض الخلايا العصبية المنتجة للدوبامين التالفة.
في الفئران ، يرتبط المثبط بالإنزيمات المنتجة للدوبامين ويمنع التحول المبكر للليفودوبا إلى دوبامين.
يدخل ليفودوبا إلى مجرى الدم, يعبر الحاجز الدموي الدماغي عبر قنوات الأحماض الأمينية, ويدخل الخلايا العصبية المنتجة للدوبامين غير التالفة.
تقوم الإنزيمات الموجودة في هذه الخلايا العصبية بتحويل ليفودوبا إلى دوبامين ، وهو ناقل عصبي مثير ، وتطلقه في المشبك.
يرتبط الدوبامين بمستقبلاته على الخلايا العصبية بعد التشابك ، مما يؤدي إلى نقل الإشارة.
كرر الحقن بشكل دوري لزيادة إنتاج الدوبامين.
بمرور الوقت ، يؤدي الدوبامين المفرط إلى الإفراط في تحفيز مستقبلاته والإشارات العصبية المفرطة ، مما يؤدي في النهاية إلى تعطيل حركات جسم الفئران.
ضع الجرذ في قفص وراقب سلوكه. يظهر الجرذ حركات جسدية لا إرادية ومتكررة ، تعرف باسم خلل الحركة ، ناتجة عن ليفودوبا.
قبل حقن L-DOPA ، أضف الحجم المناسب من المحلول الملحي المعقم إلى مزيج L-DOPA والبينسيرازيد المزن مسبقا والمجفف بالتجميد في قارورة العنبر ، ورجه جيدا لمدة 10 ثوان. مباشرة بعد التحضير ، املأ الحجم المطلوب من مزيج L-DOPA-benserazide لكل في محاقن فردية ، مثبتة بإبرة قياس 26 ، وقم بتسمية كل حقنة بتعريف فردي.
بعد إحضار القفص الأول إلى مقعد الحقن ، أخرج الجرذ من قفصه لوضعه على سطح الحقن. استخدم اليد غير المهيمنة لكبح رأس وكتفي الفئران مع راحة اليد على السطح ، وقم بتجعيد الجلد على الظهر الذي يغطي لوح الكتف بالإبهام والسبابة. استخدام اليد المهيمنة لحقن حجم لدوبا في الفضاء تحت الجلد بين الأصابع, الحفاظ على الإبرة موازية للجسم لتجنب الحقن العضلي.
بعد الحقن ، انقل الفئران إلى القفص. بعد ذلك ، اضبط المؤقت لمدة دقيقة إلى دقيقتين وكرر الإجراء ، وحقن فأر واحد كل دقيقة إلى دقيقتين حتى يتم حقن جميع الفئران. في يوم التصنيف ، ضع مؤقتا بجوار القفص لمراقبة خلل الحركة الناجم عن ليفودوبا ، أو شدة سلوك LID ، مع تقدير تكرار أي سلوك معين خلال فترة التصنيف.
قم بتقييم شدة وتواتر حركات خلل الحركة وفرط الحركة ، بما في ذلك البداية الأولية لسلوك LID ، وذروة السلوك ، ومرحلة الانخفاض في العدد المطلوب من النقاط الزمنية. إذا كنت تستخدم فواصل تصنيف دقيقة واحدة ، فقم بتعيين مؤقت لمدة دقيقة واحدة لتقييم الجرذ الأول ، واستمر في التصنيف عبر جميع الفئران على فترات دقيقة واحدة.