موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:04 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بشريحة تحتوي على جزء رقيق من العضوية القشرية التي تحتوي على الخلايا الدبقية والخلايا العصبية في مراحل مختلفة من الشيخوخة.
تحتوي الخلايا العصبية المتقدمة في السن ، في حالة الشيخوخة مع تدهور وظيفة الخلية ، على مستويات عالية من بيتا جالاكتوزيداز.
تتم معالجة القسم مسبقا بمثبت لتثبيت بنية الخلية وعامل نفاذية لاختراق أغشيةها.
ضع الشريحة في وعاء تلطيخ لغسلها بمخزن مؤقت لإزالة أي آثار محلول.
تلطخ الشريحة بمحلول يحتوي على ركيزة لإنزيم بيتا جالاكتوزيداز واحتضانه.
تدخل الركيزة إلى الخلايا ، حيث يشق بيتا جالاكتوزيداز الركيزة ، مما ينتج عنه منتج أزرق اللون يتراكم أكثر في الخلايا العصبية القديمة.
اغسل القسم مرارا وتكرارا.
أضف حاملا مضادا للبهتان واتركه يتجمد ، مما يضمن سلامة القسم الملطخ.
راقب الشريحة تحت المجهر ؛ تشير المنطقة التي تحتوي على منتج أزرق مكثف إلى الخلايا العصبية المتقدمة في السن داخل العضوية.
بعد التقطيع بالتبريد للعضيات ، قم بإزالة محلول التثبيت الزائد عن طريق نقل الشرائح إلى حاوية منزلقة بغطاء ، واغسل الأنسجة العضوية المقطعة ثلاث مرات باستخدام PBS لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، احتضن الشرائح طوال الليل عند 37 درجة مئوية بمحلول تلطيخ بيتا جالاكتوزيداز الطازج. اغسل المناديل الملطخة ثلاث مرات باستخدام PBS لمدة 10 دقائق لكل منها في درجة حرارة الغرفة لإزالة محلول بيتا جالاكتوزيديز.
الآن ، قم بتركيب المناديل المغسولة بحامل زجاجي مضاد للبهتان واترك محلول التركيب يتجمد لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة قبل مشاهدته تحت المجهر.