موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:05 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بفأر مخدر مؤمن في جهاز تجسيمي مع حلق رأسه.
تطهير فروة الرأس وعمل شق لكشف الجمجمة.
نظف الجمجمة لإزالة طبقة النسيج الضام.
باستخدام النقطة المرجعية على الجمجمة ، حدد الموقع المستهدف وحفر حفرة.
خذ حقنة تحتوي على محلول ليزوفوسفاتيديل كولين ، أو LPC ، مثبتة على الجهاز التجسيمي.
حدد إحداثيات نقطتي حقن في منطقة المادة البيضاء في الدماغ ووضع المحقنة وفقا لذلك.
حقن محلول LPC واحتفظ بالإبرة في مكانها لبعض الوقت بعد الحقن في كل موقع.
خياطة الشق واترك يتعافى.
في موقع الحقن ، يتفاعل LPC مباشرة مع المايلين ، مما يعطل هيكله ويسبب انهياره.
هذا يسبب خللا وظيفيا في الخلايا العصبية المحلية ، وبالتالي إنشاء نموذج بؤري لإزالة الميالين.
ابدأ بتوصيل إبرة قياس 32 بحقنة سعة خمسة ميكرولتر. اسحب 5 ميكرولترات من محلول LPC لتحضير الحقن. بعد ذلك ، تأكد من عمق تخدير الفأر من خلال عدم وجود منعكس قرصة إصبع القدم ، بينما يكون التنفس سلسا. ضع الماوس في إطار تجسيمي مع الجانب الظهري لأعلى ، وقم بتأمين الرأس بمخروط الأنف ومشبك الأسنان.
ثبت الماوس على الجهاز التجسيمي مع قضبان الأذن الثنائية. تأكد من أن قضبان الأذن مستوية وأن الرأس أفقي ومستقر. تطهير جلد الرأس بالمسح باليودوفور. بعد ذلك ، استخدم مشرط لقطع شق صغير إلى حوالي 1.5 سم على طول خط الوسط لفروة الرأس لكشف الجمجمة. امسح الجمجمة بقطعة قطن مغموسة في بيروكسيد الهيدروجين بنسبة 1٪ حتى تنكشف البريجما واللامدا واليافوخ الخلفي.
ضع المحقنة على الجهاز التجسيمي. تأكد من الوضع الأفقي للحيوان وحدد موقع الجسم الثفني. بمجرد تحديد موقع الحقن ، قم بتسجيل الإحداثيات وقم بعمل علامة بعلامة على الجمجمة. حفر الموقع المحدد برفق باستخدام مثقاب الجمجمة. احرص على تجنب أي نزيف.
حرك الإبرة ببطء إلى الإحداثيات المحددة. للحث على إزالة الميالين من الجسم الثفني ، قم بحقن 2 ميكرولتر من محلول LPC في كل موقع حقن بمعدل 0.4 ميكرولتر في الدقيقة. بعد الحقن ، احتفظ بالإبرة في كل موقع لمدة 10 دقائق إضافية. أخيرا ، قم بخياطة الجلد بخياطة 4-0 وانتظر حتى يستيقظ في غضون 10 دقائق.