موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:36 دقيقة • July 8th, 2025
خذ قسما ثابتا من الحصين يحتوي على خلية عصبية داخلية مملوءة بالسيتين الحيوي ، وهو جزيء مترافق بالبيوتين.
بعد ذلك ، أضف محلولا يحتوي على بروتينات مانعة ومنظف غير أيوني لمنع الارتباط غير المحدد ونفاذية الخلايا العصبية.
احتضان بجسم مضاد أولي يستهدف مستقبلات القنب المحددة على الخلايا العصبية الداخلية.
يغسل بمحلول عازل لإزالة الأجسام المضادة الزائدة.
بعد ذلك ، أضف صبغة فلورية مترافقة بالستربتافيدين وجسم مضاد ثانوي مترافق بالفلوروفور.
أثناء الحضانة ، يرتبط الستربتافيدين بقوة بالسيتين الحيوي ، مما يسمح بتصور الخلايا العصبية الداخلية المملوءة بالسيتين الحيوي ، بينما يستهدف الجسم المضاد الثانوي الأجسام المضادة الأولية المرتبطة بالمستقبلات على الخلايا العصبية الداخلية.
اشطفها بالعازلة ، وإزالة الجزيئات غير المرتبطة.
الآن ، قم بتركيب القسم باستخدام وسائط التركيب المائية. ضع غطاء الغطاء وأغلقه.
باستخدام المجهر الفلوري ، تصور الخلايا العصبية الداخلية المملوءة بالسيتين الحيوي وتعبير مستقبلات القنب ، مما يتيح تحليل مورفولوجيا الخلايا العصبية الداخلية وتوزيع المستقبلات.
قفل الأنسجة بمصل مانع بنسبة 10٪ لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، قم باحتضان الأقسام في الجسم المضاد الأولي CB1R في درجة حرارة الغرفة طوال الليل ، لتحديد التعبير الأول لمستقبلات القنب. ثم اغسل أقسام الدماغ ثلاث مرات لمدة 10 دقائق لكل منها 0.1 مولار PBS. يضاف كل من الستربتافيدين والجسم المضاد الثانوي للجسم المضاد الأولي الأول إلى صفيحة البئر ويحفظ طوال الليل عند أربع درجات مئوية.
بعد ذلك ، قم باحتضان الأقسام في صبغة الستربتافيدين الحمراء المترافقة عند أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها في الظلام للكشف عن البيوسيتين. بعد ذلك ، اغسل أقسام الدماغ ثلاث مرات لمدة 10 دقائق لكل منها 0.1 مولار PBS. لحماية التألق ولتسهيل إعادة الطلاء في المستقبل ، قم بتركيب الأقسام في وسط تثبيت مائي ، وقم بإغلاق حواف الأغطية بطلاء أظافر شفاف.