تلطيخ كيميائي مناعي لبروتين S-100 في أقسام خزعة شفط المستقيم البشري
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:02 دقيقة • July 8th, 2025
خذ أقسام خزعة شفط المستقيم البشري الثابتة مع مستضدات البروتين المكشوفة والبيروكسيداز الذاتية المعطلة
أضف محلول حجب لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحدد.
استبدل محلول الحجب بالأجسام المضادة الأولية التي ترتبط ببروتين الخلية الدبقية المستهدف ، S-100 ، وهو علامة على مرض هيرشسبرونج.
قم بإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة واحتضانها ببوليمرات البيروكسيداز لتضخيم الإشارة.
يغسل لإزالة البوليمر الزائد. أضف الأجسام المضادة الثانوية التي ترتبط ببوليمرات الإنزيم والأجسام المضادة الأولية.
قم بإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة وإضافة ركيزة كروموجينيك.
يتفاعل البيروكسيداز مع الركيزة ، ويشكل راسب ملون.
اشطفه لإزالة الرواسب الزائدة.
أضف صبغة لتلطيخ النوى.
يغسل بمحلول حمض الإيثانول لإزالة الصبغة الزائدة.
بعد ذلك ، قم بتجفيف الأقسام باستخدام تركيزات متزايدة من الإيثانول متبوعا بالزيلين.
أخيرا ، قم بالتركيب والمراقبة تحت المجهر لتصور التلوين الذي يشير إلى وجود البروتين المستهدف.
تخلص من ألبومين مصل الأبقار الزائد ، وقم بتسمية الخلايا ب 50 ميكرولترا من الجسم المضاد الأساسي محل الاهتمام عند 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها. في صباح اليوم التالي ، اشطف الشرائح بثلاث غسلات لمدة ثلاث دقائق في PBS وأضف 50 ميكرولترا من محسن البوليمر إلى كل شريحة. بعد 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية ، اغسل الشرائح ثلاث مرات في PBS
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية