إحداث إصابة عصبية مستهدفة باستخدام ليزر عالي الطاقة في يرقة ذبابة الفاكهة

ضع يرقة ذبابة الفاكهة المخدرة مع رفع رأسها على قطرة زيت على شريحة زجاجية تحتوي على بقع شحوم مفرغة.

ضع الغطاء واضغط عليه برفق للتلامس مع اليرقة.

اضبط اليرقة لكشف المنطقة التي تحتوي على الخلايا العصبية المستهدفة التي تعبر عن بروتينات الفلورسنت.

قم بتأمين الشريحة على مجهر ثنائي الفوتون.

استخدم ليزر منخفض الطاقة لتقليل الضرر ومسح اليرقة لتحديد موقع المنطقة باستخدام الخلايا العصبية المستهدفة الفلورية.

بعد ذلك ، اضبط نافذة الفحص للتركيز على المنطقة المستهدفة التي تحتوي على المحاور ، وهي نوع من الإسقاطات العصبية.

الآن ، قلل من معدل المسح وزيادة قوة الليزر.

سيضرب الليزر عالي الطاقة المحاور المستهدفة ، مما يولد حرارة موضعية تتلفها وتعزز التألق حول موقع الإصابة.

أخيرا ، عد إلى وضع الليزر منخفض الطاقة. يؤكد وجود فوهة بركان صغيرة تشبه الحلقات في موقع الإصابة إصابة الخلايا العصبية الناجحة.

ابدأ بتخدير اليرقات. في غطاء الدخان ، ضع طبقا زجاجيا مقاس 60 ملم في طبق بتري بلاستيكي بطول 15 سم. ثم قم بطي قطعة من المناديل الورقية وضعها في الطبق الزجاجي. ضع صفيحة أجار العنب على المنديل بعد إضافة ثنائي إيثيل الأثير. بعد ذلك ، على شريحة زجاجية ، ضع قطرة واحدة من زيت الهالوكربون 27 في المنتصف ، وضع بقعة من الشحوم المفرغة على كل زاوية من الزوايا الأربع.

بعد ذلك ، استخدم الملقط لنقل يرقة واحدة إلى صفيحة أجار ، وقم بتغطية الطبق الزجاجي لتخدير اليرقة. بمجرد أن تتوقف اليرقة عن الحركة ، انقلها بعناية إلى زيت الهالوكربون مع وضع رأسها في وضع رأسها. ثم ضع غطاء فوق الشريحة ، واضغط عليها برفق حتى تلامس اليرقة. بعد ذلك ، استخدم قوة لطيفة لتحريك الغطاء لدحرجة الخلايا المراد استئصالها إلى حيث يضربها ليزر الفوتون بسهولة. سيختلف الموقع اعتمادا على الخلايا العصبية المستهدفة.

الآن ، قم بتأمين التجميع في مرحلة المجهر الفوتوني ، وركز على الخلايا ذات الأهمية باستخدام هدف غمر الزيت 40x. في البرنامج ، قم بالتبديل إلى وضع المسح ، وقم بتحميل البروتوكول المحفوظ. تأكد من فتح الثقب بالكامل. ثم ، في الوضع المباشر ، احصل على صورة جيدة لمنطقة الاهتمام. بعد ذلك ، أوقف الفحص المباشر ، بحيث يصبح الزر Crop متاحا. باستخدام وظيفة الاقتصاص ، اضبط نافذة المسح لتركيز المنطقة المستهدفة على موقع الإصابة المحتمل فقط.

ثم افتح نافذة تصوير جديدة. الآن ، قلل من سرعة المسح ، وقم بزيادة شدة الليزر. ثم قم بتبديل الزر المستمر لبدء الفحص وإيقافه. راقب بعناية. بمجرد حدوث زيادة كبيرة في التألق ، قم بإنهاء الفحص. بعد ذلك ، ارجع إلى نافذة التصوير الأصلية ، وحدد الوضع المباشر ، وابحث عن المنطقة التي تم استهدافها للتو عن طريق ضبط التركيز.

من المؤشرات الجيدة على الإصابة الناجحة ظهور فوهة بركان صغيرة أو هيكل يشبه الحلقة أو حطام موضعي في موقع الإصابة. إذا كانت قوة الليزر عالية جدا ، فستكون منطقة ضرر كبيرة مرئية ، والتي يمكن أن تكون قاتلة.