قياس معلمات الميتوكوندريا المتعددة في الخلايا العصبية باستخدام قياس التدفق الخلوي

خذ الخلايا العصبية الثابتة والمتنفذة في أنبوب.

أضف حاجزا مؤقتا لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة.

الطرد المركزي التعليق وإزالة المادة الطافية. ثم أعد تعليق الخلايا العصبية في المخزن المؤقت.

انقل المعلق بالتساوي إلى أنابيب تحتوي على أجسام مضادة أولية غير موسومة وعلامات بالفلوروفور.

احتضان ، مما يسمح للأجسام المضادة بالارتباط على وجه التحديد بسلسلة الجهاز التنفسي للميتوكوندريا أو الوحدات الفرعية المعقدة MRC ، وبروتين مرتبط بالحمض النووي للميتوكوندريا ، وبروتين الغشاء الخارجي للميتوكوندريا داخل الخلايا العصبية.

قم بإزالة أي أجسام مضادة غير مرتبطة.

احتضان الأجسام المضادة الثانوية الموسومة بالفلوروفور والتي ترتبط بالأجسام المضادة الأولية غير المميزة.

الطرد المركزي الخليط والتخلص من المادة الطافية.

أعد تعليق الخلايا العصبية في المخزن المؤقت ونقلها إلى أنابيب الطرد المركزي الدقيقة.

قم بإجراء قياس التدفق الخلوي للكشف عن إشارات الفلورسنت على الخلايا العصبية المسماة ، بما يتوافق مع مستويات التعبير عن الوحدات الفرعية المعقدة MRC وقياس مستويات الحمض النووي النسبية للميتوكوندريا.

قم بحظر العينات في 1 مليلتر من المخزن المؤقت للحجب ، واغسل الخلايا عن طريق الطرد المركزي باستخدام PBS كما هو موضح. للكشف عن مجمعات الميتوكوندريا والوحدات الفرعية المختلفة ، احتضن الخلايا لمدة 30 دقيقة مع الأجسام