موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:59 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بالخلايا البشرية المعدلة وراثيا في وسط النمو.
تحتوي هذه الخلايا على نظام محفز للتتراسيكلين يمتلك بروتين سلائف الأميلويد أو جين APP وجين لوسيفيراز.
استبدل بوسط يحتوي على التتراسيكلين واحتضانه.
يرتبط التتراسيكلين ببروتين المنشط ، الذي يرتبط بمروج APP.
هذا يحفز التعبير الجيني وينتج البروتينات السليفة التي تتمركز في غشاء الخلية.
يشق إنزيم β-Secretase APP ، مما ينتج عنه جزء يظل متصلا بغشاء الخلية.
يشق γ-secretase هذا الجزء ، وينتج ببتيدات β الأميلويد ويطلق مكونا منشطا.
يدخل هذا المنشط إلى النواة ، ويرتبط بمحفز لوسيفيراز ، ويحث على التعبير الجيني ، وينتج إنزيمات لوسيفيراز.
استبدل الوسط بكاشف فحص يحتوي على ركيزة لوسيفيراز. تنتشر الركيزة في الخلايا وتتفاعل مع لوسيفيراز ، مما ينتج عنه تلألؤ بيولوجي.
استخدم قارئ صفيحة دقيقة لقياس شدة الضوء ، والتي تعكس بشكل مباشر نشاط γ سيكريتيز ، وهو إنزيم حاسم في الحالات المرضية العصبية.
عد خلايا NG أو CG باستخدام مقياس الدم. بعد ذلك ، قم بزرع الخلايا في 20,000 خلية لكل بئر على صفيحة دقيقة مكونة من 96 بئرا بحجم نهائي يبلغ 200 ميكرولتر لكل بئر في وسط النمو. انقل الصفائح الدقيقة إلى حاضنة ثاني أكسيد الكربون المرطبة ، واحتضانها عند 37 درجة مئوية طوال الليل. بعد الحضانة بين عشية وضحاها ، قم بإزالة 100 ميكرولتر من وسط النمو من كل بئر.
أضف 100 ميكرولتر لكل
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية