موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:14 دقيقة • July 8th, 2025
تحتوي مناطق الموضع اللولبي, تقع ثنائيا في جذع دماغ الفأر, على الخلايا العصبية المنتجة للنورادرينالين وتنظم مناطق مختلفة في الدماغ.
للكشف عن مناطق الموضع المزمن هذه ، ابدأ بشريحة زجاجية تحمل أقسام جذع دماغ الفأر الثابتة والمحفوظة بالتبريد.
اغسل الشريحة بمخزن مؤقت لإزالة الآثار التثبيتية.
أضف عازلة تحتوي على منظف واحتضانها لاختراق الأغشية ، ثم اغسلها.
إدخال الأجسام المضادة الأولية الخاصة بإنزيم الدوبامين β-هيدروكسيلاز ، الذي يحول الدوبامين إلى نورادرينالين ، وهو ناقل عصبي.
احتضان للسماح للأجسام المضادة بالتفاعل مع الدوبامين β-هيدروكسيلاز.
يغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
ثم أضف الأجسام المضادة الثانوية الخضراء المقترنة بالفلوروفور واحتضانها في الظلام.
ترتبط الأجسام المضادة الثانوية بالأجسام المضادة الأولية ثم تغسل.
أضف وسيط التثبيت إلى أقسام الدماغ ، ثم قم بتغطيته وجففه.
راقب الشرائح تحت المجهر الفلوري.
يشير التألق الأخضر الذي يمثل الخلايا العصبية المنتجة للنورادرينالين المسمى في أقسام الدماغ إلى وجود مناطق الموضع اللولبي.
في اليوم الأول ، اغسل شرائح الدماغ في طبق 24 بئرا 3 مرات لمدة 5 دقائق لكل منها في PBS. ثم أضف 0.5٪ PBS مع المنظف ، وقم بنفاذها عند 4 درجات مئوية لمدة 24 ساعة.
في اليوم التالي ، اغسل الشرائح ثلاث مرات لمدة 5 دقائق لكل منها بنسبة 0.5٪ PBSD. بعد ذلك ، أضف الج
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية