وضع العلامات والزرع بوساطة الفيروسية لخلايا البروز العقدية الإنسية لدراسات In Vivo
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 6:31 دقيقة • July 8th, 2025
حصاد الأنسجة البارزة العقدية الإنسية ، التي تحتوي على أسلاف الخلايا العصبية القشرية ، من أجنة الفئران المعدلة وراثيا.
أضف بوليمر كاتيوني وفصل الأنسجة إلى معلق أحادي الخلية.
أضف نواقل الفيروسات العسقرية التي تحمل مراسل GFP المعتمد على إعادة تركيب Cre محاط بمواقع lox. حضن.
يعملالبوليمر على تحييد شحنات غشاء الخلية الفيروسية والمضيفة ، مما يتيح الاندماج الفيروسي وإطلاق الحمض النووي الريبي.
يتم نسخ الحمض النووي الريبي الفيروسي عكسيا ودمجها في جينوم المضيف.
جهاز الطرد المركزي والتخلص من المادة الطافية. امتصاص الوسائط الزائدة.
انقل الخلايا إلى سطح كاره للماء وقم بتحميلها في جهاز الحقن.
حقن الخلايا في قشرة جرو الفأر المخدر.
اسمح للجرو بالتعافي والنمو.
تتمايز الأسلاف المزروعة إلى خلايا عصبية داخلية ناضجة في القشرة.
تشارك مجموعة فرعية من هذه الخلايا العصبية الداخلية في التعبير عن Cre recombinase و RFP.
في هذه الخلايا العصبية الداخلية ، يقوم Cre باستئصال مواقع lox ، مما يقلب جين GFP ويتيح التعبير عنه.
تصور التعبير المشترك RFP و GFP لتحديد الخلايا العصبية الداخلية التي تعبر عن Cre.
بعد تحضير فيروس العدسات وتشريح MGE وفقا للإرشادات الواردة في البروتوكول المكتوب ، اجمع نصفي الكرة الأرضية من MGE وضع الأنسجة في أنبوبين لتجميع سعة 1.5 مليلتر يحتويان على 500 ميكرولتر من DMEM مع FBS بنسبة 10٪.
احتفظ
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية