JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 3:23 د • July 8th, 2025
ابدأ بإضافة معلق بارد من الورم الأرومي الدبقي والخلايا الدبقية الصغيرة ، كل منها ملطخ بصبغة فلورية مميزة ، في محلول مصفوفة بوليمر بارد.
تمنع الحالة الباردة البلمرة المبكرة للمصفوفة.
بعد ذلك ، انقل الخليط إلى غرفة مسامية داخل لوحة ثقافة.
احتضان للسماح ببلمرة المصفوفة ، وتشكيل هلام يدمج الخلايا.
أضف وسائط خالية من المصل إلى وسائط النمو المحتوية على المصل إلى البئر أدناه ، ثم احتضنها.
تعمل العوامل الكيميائية الموجودة في المصل على تعزيز هجرة الخلايا نحو الوسائط الغنية بالمصل.
بالإضافة إلى ذلك ، تفرز الخلايا الدبقية الصغيرة جزيئات الإشارات التي تتفاعل مع خلايا الورم الأرومي الدبقي.
هذا يعزز هجرة خلايا الورم الأرومي الدبقي إلى الجانب السفلي من الإدخال المسامي ، مما يشبه هجرتها من الورم إلى الأنسجة المحيطة.
قم بإزالة الخلايا من أعلى الغرفة.
الآن ، قم بإصلاح الخلايا المتبقية بمثبت واغسلها بمخزن مؤقت. يساعد التألق المميز للخلايا على تتبع هجرة الخلايا.
قم بإذابة مزيج المصفوفة عند أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها. بعد ذلك ، قم بإعداد تركيز 10 مجم / مل من المصفوفة في الوسائط المناسبة على الجليد. بعد ذلك ، قم بحصاد الخلايا المسماة للتعليق في المصفوفة كما هو موضح سابقا. بعد ذلك ، قم بعمل ماصة 1.5 مرة 10 إلى خلايا GL261 الخامسة بحجم 150 ميكرولتر ، بالإضافة إلى خمسة أضعاف 10 إلى خلايا الخلايا الدبقية الصغيرة الرابعة في 50 ميكرولتر في أنبوب ميكرو فوج سعة 1.5 ملليلتر.
أضف 2 في 10 إلى خلايا GL261 الخامسة بحجم 200 ميكرولتر في أنبوب ميكرو فوج منفصل سعة 1.5 مل. قم بتدوير الخلايا في ميكروفوجي لمدة خمس دقائق بمعدل 120 مرة جرام. ثم أعد تعليق الخلايا في 200 ميكرولتر من المصفوفة الباردة على الجليد.
في هذه الخطوة ، من الضروري أن يكون لديك صينية ثلج جاهزة في الغطاء. احتفظ بالأنابيب على أطراف الثلج في الثلاجة. تأكد من تبريد كل شيء لمنع بلمرة الجل الناضج قبل الأوان.
بعد إعادة التعليق ، ضع لوحة 50,000 خلية بحجم 50 ميكرولتر في وسط المقصورة العلوية لإدراج غرفة بحجم المسام 8 ميكرون. ثم احتضنها عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة للسماح بحدوث البلمرة. بعد 30 دقيقة ، أضف 200 ميكرولتر من الوسط الخالي من المصل إلى الحجرة العلوية و 700 ميكرولتر من المصل الذي يحتوي على وسط نمو الخلايا إلى البئر السفلي.
بعد الحضانة لمدة 48 ساعة ، قم بإزالة الخلايا من الجزء العلوي من الغرفة عن طريق الشفط اللطيف. قم بإصلاح الغرف كما كان من قبل ، واستبدل المثبت ب 500 ميكرولتر من 1X PBS قبل تصوير الخلايا.
تصف هذه المقالة طريقة لدراسة هجرة خلايا الورم الأرومي الدبقي في بيئة محكومة باستخدام مصفوفة بوليمرية. يتضمن هذا النهج الزراعة المشتركة لخلايا الورم الأرومي الدبقي والخلايا الدبقية الصغيرة لمراقبة تفاعلاتها وأنماط هجرتها.
يتيح نمذجة غزو الورم الأرومي الدبقي باستخدام نظام استزراع مشترك للخلايا الدبقية الصغيرة القائم على المصفوفة تقليل المخاطر الميكانيكية للتفاعلات بين الورم والبيئة المجهرية في مرحلة الاكتشاف. ويوفر هذا النهج ثقة تنبؤية للتحقق من الأهداف ويدعم الاستمرارية الانتقالية من خلال محاكاة هجرة الخلايا ذات الصلة بالمرض. وقد صُمم هذا النظام لتوجيه قرارات المحفظة المبكرة من خلال توضيح المحركات البيئية المجهرية لتطور الورم.
يدمج نموذج الزراعة المشتركة القائم على المصفوفة هذا في التسلسل الممتد من مرحلة الاكتشاف إلى المرحلة قبل السريرية، وذلك من خلال تمكين الاختبار القائم على الفرضيات لتأثيرات البيئة الدقيقة على غزو الورم.
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
آخر تحديث: 29 أغسطس 2026