موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:39 دقيقة • July 8th, 2025
خذ صفيحة دقيقة مع إدخالات شفافة الوصيف المغلفة ببروتينات ECM لتعزيز التصاق الخلايا.
أضف الخلايا البطانية للأوعية الدموية الدقيقة في الدماغ البشري ، أو HBMECs ، إلى الإدخالات ووسط النمو إلى المقصورات السفلية.
احتضان ، مما يسمح للخلايا بالالتصاق والنمو لتصبح طبقة أحادية. تعبر هذه الخلايا عن تقاطعات ضيقة ، تحاكي بطانة الحاجز الدموي الدماغي التي تحد من مرور الخلايا والجزيئات.
قم بإزالة الوسيط. أضف خلايا الدم المحيطية أحادية النواة ، أو PBMCs ، إلى الإدخالات ووسط مزرعة إلى المقصورات السفلية.
احتضان ، مما يسمح للخلايا الليمفاوية PBMC بالتفاعل مع الخلايا البطانية ثم المرور بينها ، وهي عملية تسمى التحويل.
اشطف الجزء السفلي من الملحق ، واجمع الخلايا المنقولة الملتصقة في المقصورات السفلية.
أدخل الميكروبيدات الفلورية كمرجع لقياس كمية الخلية.
انقل المعلق إلى أنبوب ، وجهاز طرد مركزي ، وتخلص من المادة الطافية ، وأعد تعليقه في كوكتيل الأجسام المضادة المترافقة بالفلوروفور لتسمية الخلايا الليمفاوية.
الخلايا الليمفاوية المنقولة جاهزة للقياس الكمي عن طريق قياس التدفق الخلوي.
لتحضير إدخالات ثقافة الخلايا لمقايسة التحول ، قم أولا بإضافة 100 ميكرولتر من محلول الفبرونيكتين إلى كل ملحق وإلى بئر واحد من صفيحة مسطحة القاع مكونة من 96 بئرا. بعد ثلاث ساعات عند 37 درجة مئوية ، استبدل محلول الفبرونيكتين ب 100 م
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية