JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 3:15 د • July 8th, 2025
خذ فأرا يتعرض لانسداد الشريان الدماغي الأوسط ، مما يحد من تدفق الدم إلى نصف الكرة الأيمن من الدماغ.
يؤديانخفاض إمدادات الدم إلى حرمان خلايا الدماغ من الأكسجين ، ويعطل تنظيم المياه ، ويسبب تورم الخلايا أو الوذمة ، ويؤدي إلى اضطراب الحاجز الدموي الدماغي.
تموت الخلايا التالفة في النهاية ، وتشكل منطقة احتشاء.
حقن صبغة زرقاء في وريد ذيل الفئران للكشف عن اضطراب BBB.
احصد الدماغ ، وقم بتقطيعه بشفرات حلاقة ، واحتضان الشرائح في محلول صبغة الأكسدة والاختزال.
في الخلايا الحية ، تتفاعل الصبغة مع نازعة هيدروجين الميتوكوندريا وتخضع للاختزال ، مما يتحول إلى الأنسجة القابلة للحياة إلى اللون الأحمر.
تظل المناطق المحتشة ، التي تفتقر إلى نشاط نازعة الهيدروجين ، بيضاء.
امسح الشرائح ضوئيا للحصول على صور عالية الدقة.
باستخدام برنامج تحليل الصور ، قم بتطبيق مرشح أزرق للتخلص من لون الصبغة الزرقاء ، وتحويل الصور إلى تدرج الرمادي.
ضع العتبة لتمييز الأنسجة السوداء السليمة عن الأنسجة البيضاء المحتشة.
احسب منطقة الاحتشاء ووذمة الدماغ كنسبة مئوية من نصف الكرة المقابل غير المتأثر.
للبدء ، قم بإزالة دماغ الفئران وقطع أقسام أفقية بسمك 2 ملم بشفرة حلاقة أحادية الحافة غير مطلية بالفولاذ المقاوم للصدأ مقاس 0.009 بوصة. ضع الأقسام في 0.005٪ TTC واحتضانها لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية. بعد ذلك ، ضع أنسجة المخ على شرائح المجهر وقم بإجراء مسح بصري لشرائح الدماغ الست بدقة 1600 × 1600 نقطة في البوصة. استخدم محرر الصور لإضافة مرشح أزرق إلى الصور.
بعد فتح البرنامج ، انتقل إلى الصورة والتعديلات وخلاط القنوات. حدد Blue كقناة إخراج وحدد أحادي اللون. ثم انقر فوق OK. احفظ الصورة بتنسيق ملف JPEG. استخدم أداة تحديد المضلع في الإصدار 1.37 من ImageJ لتحديد كل نصف كرة من كل شريحة من شرائح الدماغ الست وحفظها كملف صورة منفصل.
لحساب حجم الاحتشاء ووذمة الدماغ ، استخدم ماكرو لتحويل وحدات البكسل في الصورة إلى الأبيض أو الأسود بناء على عتبة. بعد ذلك ، أغلق جميع الملفات واستخدم ماكرو ثان لمقارنة عدد وحدات البكسل البيضاء والسوداء لتحديد حجم الاحتشاء ووذمة الدماغ. انسخ البيانات الأولية إلى جدول بيانات. عند حساب حجم الاحتشاء ، قم بتصحيح تورم الأنسجة باستخدام نسب نصفي الكرة المخية المماثلين والمقابلين. عبر عن مناطق وذمة الدماغ كنسبة مئوية من المناطق القياسية في نصف الكرة الأرضية المقابل غير المتأثر.