تقييم المقاومة الكهربائية عبر البطانة في نموذج الحاجز الدموي الدماغي في المختبر

ابدأ بإدراج غشاء يحتوي على خلايا بطانة الأوعية الدموية الدقيقة في دماغ الفأر ، تشبه الحاجز الدموي الدماغي في المختبر.

ضع هذا الملحق في المقاومة الكهربائية عبر البطانة أو أداة TEER تحتوي على قطب كهربائي مدمج.

أضف وسائط جديدة إلى المقصورة السفلية.

ضع الغطاء بأقطاب كهربائية فوق آبار TEER ، ثم ضع الأداة في حاضنة وقم بتوصيلها بنظام تسجيل.

تولد الأقطاب الكهربائية تيارا كهربائيا عبر طبقة الخلية لقياس مقاومة البطانة.

تعيق البروتينات الوصلية السليمة بين الخلايا تدفق التيار ، مما يؤدي إلى ارتفاع قيمة TEER.

افصل الأداة وقم بإزالتها.

قم بفك الغطاء ، وإزالة بعض الوسائط من المقصورة العلوية ، وأضف الخلايا التائية التي تم تنشيطها مسبقا. أعد تجميع الجهاز لقياس TEER.

تتفاعل الخلايا التائية المنشطة مع الخلايا البطانية ، وتطلق العوامل الالتهابية والإنزيمات المحللة للخلايا ، مما يؤدي إلى تعطيل سلامة الوصلة.

يزيد هذا الاضطراب من تدفق التيار الكهربائي ، مما يؤدي إلى انخفاض قيمة TEER.

لإعداد قياس TEER ، ضع الوحدة المكونة من 24 بئرا لأداة TEER في غطاء التدفق الرقائقي. قم بإزالة الأغطية ، وضع الإدخالات مع MBMECs في الجهاز باستخدام الملقط.

بعد ذلك ، قم بعمل ماصة 810 ميكرولتر من الوسط الطازج إلى المقصورة السفلية لآبار الوحدة. أضفه بعناية بين الملحق وجدار الوحدة جيدا. بعد ذلك ، أغلق الأغطية وضع الأداة في الحاضنة. قم بتوصيل الجهاز بالكمبيوتر. ثم قم بتشغيل وحدة التحكم في العدادات وافتح البرنامج.

في النافذة المنبثقة، حدد "قياس جديد". حدد مربعي "إظهار TEER" و "إظهار Ccl" ، ثم اضغط على "ابدأ". بعد الانتهاء من القياس الأول ، حدد "فحص جميع الآبار" في علامة التبويب "النتائج" لرؤية جميع قيم TEER و Ccl. ثم احفظ الملف.

بعد ذلك ، اختر النقطة الزمنية للزراعة المشتركة ل MBMECs مع الخلايا التائية عندما يكون Ccl مستقرا وأقل من 1 ميكروفاراد لكل سنتيمتر مربع ووصل TEER إلى أقصى مستوى. افحص بعناية قيم TEER و Ccl المطلقة ، واستبعد الآبار التي لم تطور فيها MBMECs طبقات أحادية التقاء بما فيه الكفاية عن طريق إلغاء تحديد هذه الآبار.

قم بتجميع بقية الآبار عن طريق النقر بزر الماوس الأيمن على الآبار وتحديد "إضافة بئر إلى متوسط البئر الجديد". قم بتسميته في النافذة المنبثقة وافعل الشيء نفسه لجميع الآبار الفردية التي سيتم تجميعها. بعد ذلك ، تحقق من جميع الآبار المتوسطة للتأكد من أن جميعها لها نفس الظروف الأولية قبل الزراعة المشتركة.

في علامة التبويب "تجربة"، اضغط على "إيقاف مؤقت". افصل الأداة وأخرجها من الحاضنة. ثم قم بإزالة الأغطية الموجودة في غطاء التدفق الرقائقي. بعد ذلك ، قم بإزالة بعض الوسيط من الإدخال في حجرة البئر العلوية. أضف الخلايا التائية إلى MBMECs عن طريق سحب 150 ميكرولتر من الوسط بعناية. ثم أعد توصيل الجهاز ، واضغط على "استئناف القياس". بعد 24 ساعة ، اضغط على "إيقاف" في علامة التبويب "تجربة" واحفظ الملف.