تلطيخ كيميائي مناعي للألياف العصبية في النواة القاعدية لماينر في دماغ الفأر

خذ قسما ثابتا لدماغ الفأر يحتوي على النواة القاعدية لمينرت ، الغنية بالألياف العصبية التي تعبر عن إنزيم أسيتيل ترانسفيراز الكولين.

تتم معالجة القسم مسبقا لتعطيل البيروكسيديز الداخلي.

أضف منظفا لاختراق الأغشية الخلوية ، متبوعا بمحلول مانع لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة.

استبدل المحلول بالأجسام المضادة الأولية التي ترتبط بالكولين أسيتيل ترانسفيراز.

يغسل بمحلول عازل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة. احتضان الأجسام المضادة الثانوية الموسومة بالبيوتين ، والتي ترتبط بالأجسام المضادة الأولية.

قم بإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة وإضافة مجمعات أفيدين-بيوتين-بيروكسيداز، التي ترتبط بالأجسام المضادة الثانوية.

يغسل لإزالة المجمعات الزائدة.

أضف ركيزة كروموجينيك تتفاعل مع البيروكسيديز ، وتشكل راسب ملون.

اشطفها بالماء المقطر لإزالة الرواسب الزائدة.

انقل القسم إلى شريحة جيلاتينية.

بعد ذلك ، قم بتجفيف القسم باستخدام زيادة تركيزات الإيثانول ، متبوعا بالزيلين.

قم بتركيب القسم وراقبه تحت المجهر لتصور الألياف العصبية الملطخة.

لوضع العلامات الكيميائية المناعية لأقسام الأنسجة ، بعد منع أي ارتباط غير محدد بمصل بقري طبيعي بنسبة 10٪ في 0.1٪ Triton X-100 ، في محلول ملحي مخزن ثلاثي ، قم بتسمية الأقسام بالجسم المضاد الأساسي ذي الأهمية ، لمدة 48 ساعة عند أربع درجات مئوية.

في نهاية الحضانة ، اغسل ا