وضع العلامات على الخلايا العصبية الداخلية المملوءة بالسيتين الحيوي في شرائح الحصين الفئران للتصور
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 5:06 دقيقة • July 8th, 2025
خذ شرائح الحصين الثابتة والمتنفذة للفئران التي تحتوي على الخلايا العصبية الداخلية المملوءة بالسيتين الحيوي مع بيروكسيداز داخلي
معطلأضف مجمعات أفيدين البيوتين (ABC) التي تحتوي على بيروكسيداز الفجل الحار (HRP) واحتضانها ، مما يسمح لأفيدين بالارتباط بالسيتين الحيوي.
اغسل ABC غير المنضم.
أضف مزيجا من الركيزة الملونة ومحسن المعدن ، ثم احتضن.
أدخل بيروكسيد الهيدروجين لتنشيط HRP ، الذي يؤكسد الركيزة لتكوين راسب مظلم ، بينما يحسن المحسن التباين.
انقل الشرائح إلى ورق الترشيح وقم بإزالة المخزن المؤقت الزائد. عالج برباع أكسيد الأوزميوم لتعزيز التباين.
ضع الشرائح على شريحة وقم بتثبيتها. قم بتجفيفها باستخدام زيادة تركيزات الإيثانول.
اغسل الشرائح بالإيثانول المطلق وأكسيد البروبيلين.
أضف الراتنج للتسلل إلى الأنسجة.
ضع الشرائح في لوشب وسخنها لبلمرة الراتنج. انقل الشرائح إلى شريحة ، ضع غطاء ، وقم بتجميد الراتنج.
باستخدام الفحص المجهري الضوئي ، تصور الخلايا العصبية الداخلية المملوءة بالسيتين الحيوي الملطخة بشكل داكن.
ضع الأقسام في قارورة زجاجية نظيفة تحتوي على PBS. قم بإجراء تفاعل أفيدين HRP عن طريق احتضان الأقسام أولا في مركب أفيدين بيوتين ، أو ABC ، لمدة ساعتين على الأقل لتضخيم منتج تفاعل HRP.
بعد ذلك ، اغسل الأقسام باستخدام PBS 3 مرات لمدة 10 دقائق ، ثم باستخدام مخزن Tris المؤقت مرتين لمدة 10 دق
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية