موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:39 دقيقة • July 8th, 2025
خذ أطباق بتري التي تحتوي على توزيع موحد لطعام الديدان على وسط نمو الديدان الخيطية.
اقلب كل لوحة وحدد المركز.
باستخدام المجهر ، أدخل ديدان Caenorhabditis elegans إلى البقعة ذات العلامات المركزية.
ثم أدخل الديدان المطابقة للعمر على الأطباق المتبقية.
تعبر هذه الديدان إما عن الأشكال البرية أو الطافرة لبروتين مرتبط بالحمض النووي الريبي البشري ، والذي يشكل مجاميع سامة في السيتوبلازم العصبي ، ويؤدي إلى موت الخلايا العصبية.
هذا يقلل من قدرة الديدان على التحكم في حركات العضلات ، مما يؤدي إلى ضعف الوظيفة الحركية.
اسمح للديدان بالزحف لفترة محددة.
باستخدام المجهر ، حدد الموقع النهائي لكل دودة.
قم بقياس المسافة الشعاعية التي تقطعها الديدان من البقعة المركزية إلى مواقعها النهائية.
بالمقارنة مع الضوابط ، تظهر الديدان التي تعبر عن مستويات أقل من البروتين من النوع البري ضعفا حركيا خفيفا ، وأولئك الذين لديهم مستويات أعلى من البروتين من النوع البري يظهرون ضعفا معتدلا ، وأولئك الذين لديهم البروتين المتحور يظهرون ضعفا شديدا.
اقلب لوحات فحص NGM رأسا على عقب ، وقم بتسمية الجزء السفلي بمعرف ل C. ايليجانس السلالات المراد فحصها. اصنع نقطة صغيرة مع العلامة في وسط اللوحة المقلوبة. أثناء العمل باستخدام مجهر تشريح ، انقل الديدان إلى مركز لوحة الفحص ، واضبط مؤقتا لمدة 30 دقيقة. ضع الغطاء مرة أخرى على الطبق وضعه جانبا. استمر في نقل الديدان حتى تصبح جميع السلالات على لوحات الفحص المحددة.
بعد 30 دقيقة ، ابدأ في تسجيل اللوحة الأولى عن طريق إزالة الغطاء ووضع اللوحة ووجهها لأسفل تحت مجهر التشريح. اضبط تركيز المجهر حتى تظهر جميع الديدان من خلال أجار. باستخدام قلم طرف ملون مختلف من النقطة المركزية ، ضع نقطة صغيرة في موقع كل دودة.
تحقق من حافة اللوحة ، حيث قد ينتهي الأمر ببعض الديدان هناك. أيضا ، قم بحساب وتسجيل عدد الديدان التي لم تتحرك من النقطة المركزية. قم بقياس المسافة من نقطة المركز إلى علامات الموقع النهائية لكل دودة، وسجل المسافة باستخدام المسطرة. يتم تمييز نقطة الدودة الأولى بشرطة شرطة. سجل بيانات الطول لكل نقطة على التوالي عن طريق تدوير اللوحة في اتجاه عقارب الساعة.