التهجين في الموقع باستخدام مجسات قليل النوكليوتيدات لدراسة تعبير الحمض النووي الريبي في أقسام دماغ الفئران

خذ أقسام دماغية ثابتة من فأر مصاب بمتلازمة السيروتونين ، مما يؤدي إلى تغيير تخليق الحمض النووي الريبي لمستقبلات السيروتونين في الخلايا العصبية.

تجفيف الأنسجة باستخدام الكحول. استخدم محلول المعالجة المسبقة لتعطيل إنزيمات التحلل المائي الذاتية ، مما يمنع تفاعلها مع كواشف الكشف.

عالج بمخزن مؤقت مغلي لكسر الروابط المتشابكة الناجمة عن التثبيت ، مما يؤدي إلى تعريض الحمض النووي الريبي المستهدف.

قم بتجفيف الأنسجة ، وارسم حاجزا كارها للماء ، واحتضانه بمحلول لاختراق الأغشية الخلوية.

أضف مجسات قليل النوكليوتيدات واحتضانها ، مما يسمح للمجسات بالتهجين مع الحمض النووي الريبي المستهدف.

اغسل لإزالة المجسات غير المرتبطة ، ثم احتضانها باستخدام كواشف التضخيم التي تحتوي على مكبر للصوت ، ومكبر للصوت ، ومجسات ملصقات مترافقة بالإنزيم ترتبط بمجسات قليل النوكليوتيدات.

احتضان مع ركائز كروموجينيك يتم تحللها بواسطة المجسات المترافقة بالإنزيم ، مما ينتج عنه لون مرئي.

عالج بالزيلين لزيادة شفافية الأنسجة ، وإضافة وسيط تثبيت ، وتطبيق غطاء.

تحت المجهر ، تساعد البقع الملونة في الأنسجة في تحديد تعبير الحمض النووي الريبي المستهدف.

في هذا الإجراء ، للجفاف ، خذ أربع شرائح لصناديق شرائح المجهر المخزنة في الفريزر سالب 80 درجة مئوية. قم بتعيين الأقسام لاختبارات جينات ppiB و dapB و ht2a. ضع علامة عليها وقم بتسميتها بقلم حب