موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:41 دقيقة • July 8th, 2025
خذ نموذجا للحاجز الدموي الدماغي في المختبر ، أو BBB ، الذي يتكون من جزأين مفصولين بغشاء مسامي.
تحتوي الحجرة العلوية أو اللمعية على خلايا بطانة الأوعية الدموية الدقيقة. تعبر هذه الخلايا عن تقاطعات ضيقة ، تحاكي بطانة الحاجز الدموي الدماغي التي تحد من مرور الخلايا والجزيئات.
تحتوي الحجرة السفلية أو المسببة على الخلايا العصبية والخلايا النجمية والخلايا الدبقية الصغيرة ، والتي تمثل حمة الدماغ.
أدخل فيروسا عصبيا في الحجرة اللمعية لمحاكاة العدوى المنقولة بالدم واحتضانها.
يتم التحصين داخل الخلايا بواسطة الفيروس بواسطة الخلايا البطانية ، ويخضع للتهريب داخل الخلايا داخل الحويصلات ، ويتم إطلاقه على الجانب العظمي.
بعد الحضانة ، قم بإزالة الغرفة العلوية. أخذ عينات من الوسط من الجانب السفلي لتقييم الكمية الفيروسية ، مما يؤكد العبور الناجح للطبقة البطانية.
أضف وسيطا طازجا واحتضنه مرة أخرى.
يدخل الفيروس الخلايا العصبية عن طريق الالتقام الخلوي ، ويتكاثر ، ويطلق ذرية فيروسية.
تحديد الحمل الفيروسي المتزايد خارج الخلية لتأكيد الغزو العصبي الفيروسي والتكاثر.
بعد إعداد جهاز دماغ صغير BBB ، كما هو موضح ، أضف 3,500 وحدة تشكيل لويحات من سلالة الفيروس العصبي الفرنسي لفيروس الحمى الصفراء ، مخففة في 50 ميكرولتر من وسط الخلايا البطانية FBS 2٪ بعناية فائقة أعلى الحجرة اللمعية. تلقيح الدماغ الصغير BBB ب 50 ميكرولتر من وسط الخلايا البطانية FBS 2٪ بدون فيروس. بعد ذلك ، ضع جهاز BBB الصغير المعرض للفيروس في الحاضنة لمدة 24 ساعة.
في اليوم التالي ، قم بإزالة الإدخالات لتحديد نفاذية الخلايا البطانية في بئر مرافق ، كما هو موضح للتو ، واحتفظ ب 1 مليلتر من العينة من كل بئر لتحديد عيار الفيروس في الحجرة العظمية.
تحت الملحق برفق لتجنب تسرب المقصورة اللمعية إلى المقصورة اللامعة.