JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 3:26 د • July 8th, 2025
ابدأ بأدمغة ذبابة الفاكهة المعدلة وراثيا ، والتي تحتوي على أنواع مختلفة من الخلايا الدبقية التي تؤوي نظام إعادة تركيب خاص بالخلية.
إنه يقود التعبير عن بروتين سطح الخلية المدمجة في حواتم مستضدية مختلفة على نفس النوع من الخلايا.
عالج الأنسجة بمثبت لربط البروتينات والحفاظ على بنية الأنسجة.
يغسل لإزالة المثبت الزائد.
أضف البروتينات الحاجزة لإخفاء مواقع الربط غير المحددة لتقليل تلطيخ الخلفية.
احتضان الأنسجة بكوكتيل الأجسام المضادة الأولية التي ترتبط بالحواتم المختلفة المعبر عنها في الخلايا الدبقية.
يغسل لإزالة الأجسام المضادة الأولية غير المقيدة.
احتضان الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالفلوروفور التي ترتبط بالأجسام المضادة الأولية.
يغسل لإزالة الأجسام المضادة الثانوية غير المرتبطة.
قم بتركيب الدماغ داخل فاصل التصوير وضع غطاء للفاء. يخلق الفاصل غرفة للأنسجة ، ويحافظ على هيكلها ثلاثي الأبعاد.
تسمح الخلايا المختلفة من نفس النوع الدبقي المسمى بأجسام مضادة مختلفة مترافقة بالفلوروفور بفهم تفاعلات الخلية الخلية.
انقل الأدمغة المعزولة باستخدام طرف ماصة P10 إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 200 ميكرولتر بمحلول تثبيتي. لا تتعامل أبدا مع الأدمغة باستخدام الملقط. احتضان الأنسجة المحمية من الضوء. تجنب شفط الأدمغة أثناء نقل المحلول.
لإزالة المثبت ، استخدم ثلاث غسلات أو أكثر لمدة 15 دقيقة بمحلول الغسيل. بعد ذلك ، قم بسد الأنسجة بمحلول مانع لمدة 30 دقيقة أو أكثر. بعد ذلك ، استبدل محلول الحجب بالأجسام المضادة الأولية المخففة في محلول الغسيل ، واحتضان الأدمغة طوال الليل عند 4 درجات مئوية.
لإزالة الأجسام المضادة الأولية ، استخدم ثلاث غسلات لمدة 1 ساعة في محلول الغسيل. بعد ذلك ، أضف الأجسام المضادة المترافقة بالفلوروفور الثانوية في محلول الغسيل ، واحتضان الدماغ طوال الليل عند 4 درجات مئوية ، أو لمدة 4 ساعات في درجة حرارة الغرفة. لغسل الأجسام المضادة غير المرتبطة تماما ، استخدم ثلاث غسلات لمدة ساعة واحدة في محلول الغسيل ، متبوعة بغسل أطول باستخدام PBS.
ثم قم بتركيب العقول. قم بإعداد غطاءين باستخدام فاصل التصوير. في الفاصل ، وعلى الغطاء الإضافي ، ضع 10 ميكرولتر من وسط التثبيت باستخدام عامل مضاد للبهتان. بعد ذلك ، باستخدام ماصة P10 ، انقل الأدمغة إلى الغطاء ، وقم بإيداعها بجوار الوسط مع بعض PBS. لا تدع الأنسجة تجف.
الآن ، انقل الأدمغة بعناية إلى وسط التركيب ، باستخدام الماصة. وأخيرا ، انقلها إلى الوسط الموجود في الفاصل ورتبها بالملقط. ثم قم بإزالة البطانة اللاصقة على الفواصل وقم بإرفاق غطاء. قم بتأمين الغطاء بقليل من الضغط باستخدام الملقط واستمر على الفور في التصوير.
تفصل هذه المقالة بروتوكولاً لتصوير الخلايا الدبقية في أدمغة ذبابة الفاكهة (Drosophila) المعدلة وراثياً باستخدام تقنيات التألق المناعي. وتؤكد الطريقة على أهمية الحفاظ على بنية الأنسجة وتقليل صبغة الخلفية لضمان التصوير الدقيق للتفاعلات الخلوية.
يُتيح صبغ التألق المناعي عالي الدقة لأدمغة ذبابة الفاكهة (Drosophila) تصويرًا دقيقًا للخلايا المفردة للمجموعات الفرعية الدبقية، مما يدعم تقليل المخاطر الميكانيكية في مراحل الاكتشاف المبكرة لعلم الأحياء العصبي. ويعزز هذا النهج من الثقة التنبؤية في التحقق من الأهداف من خلال السماح بالتصور المباشر للتفاعلات بين الخلايا وتعبير العلامات الخاصة بالمجموعات الفرعية. كما تم وضع هذه الطريقة لتوجيه قرارات المحفظة البحثية في الحالات التي تشكل فيها البيولوجيا الدبقية أساسًا للمسارات المرتبطة بالأمراض.
يتكامل سير عمل التألق المناعي هذا مع مراحل الاكتشاف المبكر والتحقق من الهدف، مما يشكل جسراً نحو التصوير قبل السريري والفحص المظهري عندما تكون بيولوجيا الخلايا الدبقية متورطة.
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
آخر تحديث: 29 أغسطس 2026