تقييم امتصاص الجلوكوز في الخلايا العصبية الحركية ليرقات ذبابة الفاكهة مع استقلاب الجلوكوز المنظم

ضع يرقات ذبابة الفاكهة المتحولة في أطباق منفصلة تحتوي على عازل خال من الجلوكوز.

تشريح اليرقات لإزالة الأعضاء الداخلية ، وتعريض الجهاز العصبي المركزي أو الجهاز العصبي المركزي.

يشتمل الجهاز العصبي المركزي على حبل عصبي بطني يؤوي الخلايا العصبية الحركية. في اليرقات الطافرة ، تظهر هذه الخلايا العصبية استقلاب الجلوكوز upregulated upregulated

تعبر الخلايا العصبية الحركية في كلتا المجموعتين عن مستشعرات الجلوكوز داخل الخلايا التي تحتوي على فلوروفورات مانحة ومتقبلة.

ضع اليرقات تحت مجهر متحد البؤر. عند الإثارة ، ينبعث الفلوروفور المتبرع من الفلور.

حدد موقع الخلايا العصبية الحركية باستخدام هذا التألق.

استبدل المخزن المؤقت بمحلول مكمل بالغلوكوز.

يدخل الجلوكوز إلى الخلايا العصبية ، ويرتبط بالمستشعرات ويؤدي إلى تغيير توافقي يجلب الفلوروفورين على مقربة.

عند الإثارة ، يمتص المتقبل الطاقة المنبعثة من المتبرع ، والتي تسمى نقل طاقة الرنين الفلوري أو FRET ، وينبعث منها التألق.

ترتبط إشارة FRET بامتصاص الجلوكوز. تشير شدة إشارة المستقبل الأعلى في اليرقات الطافرة مقارنة بالتحكم إلى استقلاب الجلوكوز المنظم.

قبل البدء في التشريح ، قم بتشغيل مجهر التصوير والليزر. ثم اجمع يرقة الطور الثالث المتجولة. اشطفه بالماء المقطر المزدوج وضعه في قطرة من المخزن المؤقت HL3 على طبق مبطن بالتلاط الصناعي معد مسبقا.

بعد ذلك ،