موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 4:46 دقيقة • July 8th, 2025
خذ قسما ثابتا لأنسجة دماغ الفأر يحتوي على مجموعة متفرقة من الخلايا النجمية التي تعبر عن بروتين فلوريسنت.
عالج الجزء العائم بحرية بمحلول يحتوي على منظف لاختراق الخلايا.
احتضان القسم في مخزن مؤقت مانع لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة.
عالج القسم بالأجسام المضادة الأولية واحتضانه للسماح للأجسام المضادة بالارتباط ببروتينات الفلورسنت في الخلايا النجمية.
اغسل أي أجسام مضادة أولية زائدة باستخدام المخزن المؤقت.
بعد ذلك ، احتضان القسم بالأجسام المضادة الثانوية الموسومة بالفلوروفور والتي ترتبط بالأجسام المضادة الأولية.
اغسل الأجسام المضادة الثانوية غير المرتبطة بمخزن مؤقت.
انقل القسم إلى خليط ماء منزوع الأيونات لإزالة بقايا المنظفات.
ضع القسم على شريحة تحتوي على ماء منزوع الأيونات العازلة. قم بإزالة السائل الزائد وإضافة وسائط التثبيت. ثم ضع غطاء وقم بتثبيته.
أخيرا ، استخدم الفحص المجهري متحد البؤر لتصور الخلايا النجمية التي تعبر عن البروتين الفلوري المسمى داخل القسم.
للبدء ، قم بإعداد محلول جديد من TBST عن طريق إضافة 1 مليلتر من 10٪ Triton X إلى أنبوب سعة 50 مليلتر وملء الأنبوب إلى 50 مل ب TBS. قم بإعداد 2 مل من محاليل الحجب والأجسام المضادة لكل دماغ عن طريق الجمع بين مصل الماعز و TBST في أنبوب سعة 15 ملليلترا.
بعد ذلك ، قم بتسمية صفيحة مكونة من 24 بئرا لوضع عينات مختلفة في صفوف مختلف
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية