$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
خذ دماغ فأر تم حصاده حديثا وقم بتجميده سريعا في الأيزوبنتان المبرد مسبقا للحفاظ على الأنسجة بسرعة.
بعد ذلك ، انقل الدماغ ، جانب القشرة لأعلى ، إلى مصفوفة دماغية مجمدة للحفاظ على بيئة باردة أثناء التقطيع.
اسمح للدماغ بالتوازن مع درجة حرارة المصفوفة. قم بمحاذاة المصفوفة على طول الجيوب الأنفية السهمية والعرضية لضمان الأقسام المتماثلة.
أدخل شفرات مبردة في الدماغ ، مما يضمن المحاذاة المناسبة.
ثم اضغط عليها بالتساوي للحصول على أقسام دماغ موحدة.
قم بإزالة الشفرات مع الأقسام وضعها ، الجانب المنقاري لأعلى ، على طبق زجاجي مجمد.
قم بتنظيم الأقسام من التوجيه المنقاري إلى التوجيه الذيلي بالترتيب التشريحي الصحيح. الآن ، افصلواهم.
باستخدام مرجع دماغي مناسب ، حدد موقع منطقة الاهتمام واستبعدها من القسم.
انقل الأنسجة المستأصلة إلى قارورة مبردة مسبقا لتحليلها في اتجاه مجرى النهر.
بعد إزالة الأدمغة من الفئران البرية البالغة CD-1 التي تم القتل رحيمة ، تقوم بتجميد الأنسجة لمدة 60 ثانية إما في النيتروجين السائل أو الأيزوبنتان المبرد مسبقا بالثلج الجاف ، وتخزينها عند -80 درجة مئوية.
قبل 24 ساعة من تشريح الأنسجة ، ضع مصفوفة دماغ نظيفة على كومة من عبوات الفريزر المذابة ، وقم بوضع جوانب المصفوفة بين عبوتين من الفريزر ، مع التأكد من ترك ما يقرب من نصف سنتيمتر بين الجزء السفلي من فتحات الحلاقة وأعلى العبوات.
قم بإعداد صفيحة زجاجية مجمدة للتشريح عن طريق ملء صندوق معزول بالثلج حتى حوالي 5 سم من الأعلى. ثم ضع طبقة من الثلج الجاف بطول 2.5 سم في الأعلى وقم بتغطيتها بأغطية بلاستيكية سوداء. ضع لوحا زجاجيا فوق البلاستيك والثلج الجاف حول حدود اللوحة.
قم بإزالة مصفوفة الدماغ المجمدة من الفريزر وأدخل جانب قشرة الدماغ لأعلى في المصفوفة. اترك الأنسجة تتوازن مع درجة الحرارة في الصندوق لمدة 10 دقائق ، مع إبقاء الغطاء مفتوحا خلال هذا الوقت. استخدم ملقطا باردا لضبط موضع الدماغ في المصفوفة ، بحيث يصطف الجيوب الأنفية السهمية والجيوب الأنفية المستعرضة مع الأخاديد العمودية للكتلة.
بمجرد أن يصبح الدماغ في موضعه ، ضع شفرة حلاقة مبردة بالقرب من مركزها واضغط عليها حوالي 1 ملليمتر في الأنسجة. بعد ذلك ، ضع شفرة مبردة واحدة في كل طرف من طرفي الدماغ واضغط على طول الطريق لأسفل في المصفوفة. بعد ذلك ، ابدأ في إضافة شفرات مبردة في الطرف المنقاري ، ووضعها في الفتحات واحدة تلو الأخرى والضغط عليها برفق 1 ملم في الأنسجة. استمر في إضافة الشفرات على فترات 1 ملم ، والعمل نحو النهاية الذيلية.
عندما تكون جميع الشفرات في مكانها ، اضغط لأسفل من الأعلى بأصابع أو راحة اليد أو أي شيء غير حاد ، وهزها ببطء من جانب إلى آخر لتحريكها عبر الأنسجة. بمجرد وصول الشفرات إلى قاع الفتحات ، أمسك كل جانب من مجموعة الشفرات ، وحررها من المصفوفة عن طريق التأرجح ذهابا وإيابا.
بعد تحرير مجموعة الشفرات ، ضعها على الجانب المنقاري لأعلى على اللوح الزجاجي ، وضع الثلج الجاف بجوار المكدس أو فوقه لتجميد العينات لتسهيل الفصل. بعد ذلك ، ضع المكدس بحواف حادة لأسفل وافصل الشفرات عن طريق تحريك المكدس بين الإبهام والأصابع.
قم بمحاذاة القسم الموجود على الألواح الزجاجية من المنقاري إلى الذيلي ، وافصل الأنسجة عن الشفرات عن طريق ثنيها بين الأصابع أو عن طريق فصلها بشفرة مبردة ثانية. في بعض الأحيان ، قد تلتصق الأنسجة بجانبي الشفرة ويجب توخي الحذر للحفاظ على الاتجاه من الأدوار إلى الذيلية.
قبل البدء في التشريح ، افتح أطلس دماغ ألين ماوس أو مرجع آخر وابحث عن المعالم اللازمة لتحديد مناطق الاهتمام. استخدم ملقطا أو شفرات مبردة لقلب القسم ، وتأكد من أن منطقة الاهتمام متسقة في جميع أنحاء القسم.
قم بتقطيع القسم بمشرط أو لكمة نظيفة ، وادفع المعدن برفق ولكن بقوة في الأنسجة ، وهزه ذهابا وإيابا لعمل القطع. بعد حصاد المنطقة محل الاهتمام ، ضعها في أنابيب مسبقة التبريد سعة 1.5 مليلتر ، وقم بتخزينها عند -80 درجة مئوية.