تقييم حالة Palmitoylation لبروتينات غشاء الخلية من أنسجة دماغ الفئران
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 5:45 دقيقة • July 8th, 2025
خذ بروتينات غشاء الخلية من أنسجة دماغ الفئران.
تظهر هذه البروتينات تعديلا بعد الترجمة مع مجموعات بالميتويل ، وهو حمض دهني ، مرتبط ببقايا السيستين.
أضف حاجزا مخزلا واحتضانه عند درجة حرارة عالية لكسر الروابط بين السيستين غير البالميتويلاتي ، مما يؤدي إلى تعريضها.
احتضان بكاشف مانع يرتبط بالسيستين المكشوف، تاركا فقط السيستين البالميتويليد متفاعل.
انقل المحلول واخلطه مع الكلوروفورم والميثانول والماء منزوع الأيونات ، وقم بطرده المركزي لترسيب البروتينات وإزالة أي شوائب. بعد ذلك ، أضف الميثانول وأجهزة الطرد المركزي وتخلص من أي ملوثات متبقية.
أضف عازلة ، صوتنة لإذابة الحبيبات ، ثم أجهزة الطرد المركزي وإزالة المواد غير القابلة للذوبان.
ضع كاشف الشق لإزالة مجموعات البالميتويل من السيستين البالميتويل.
كرر ترسيب الكلوروفورم والميثانول وإزالة أي شوائب.
احتضان ببوليمر يرتبط بالسيستين غير المسدودة ، مما يساعد على تحديد البروتينات البالميتويلية.
كرر ترسيب الكلوروفورم والميثانول وقم بإزالة أي بوليمرات غير مرتبطة.
أعد تعليق الحبيبات لمزيد من التحليل لحالة النخيل للبروتينات المعزولة.
أولا ، قم بتعطيل روابط ثاني كبريتيد عن طريق احتضان البروتين المذاب في 25 ميكرولتر من TCEP ، لمدة 60 دقيقة عند 55 درجة مئوية. بعد ذلك ، قم بحظر السيستين الحر عن طريق احتضان المحلول ب 12.5 ميكرولتر من محلول مخزون NEM لمدة
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية