موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:08 دقيقة • July 8th, 2025
خذ جدار جسم ذبابة الفاكهة يرقات ، التي تتكون من عضلات تعصبها الخلايا العصبية الحركية لتشكيل تقاطعات عصبية عضلية أو NMJs.
يحتوي غشاء العضلات بعد المشبكي في NMJ على بروتينات مرتبطة بالغشاء المتفاعلة ، والتي يتم تصنيفها بالأجسام المضادة الأولية.
أضف مقايسة ربط القرب ، أو PLA ، المجسات التي تحتوي على أجسام مضادة ثانوية مترافقة مع قليل النوكليوتيدات أحادية الشريطة. احتضان المجسات لترتبط بالأجسام المضادة الأولية.
اغسل أي مجسات غير مقيدة.
احتضان مع مخزن الربط الذي يحتوي على قليل النوكليوتيدات الموصل وإنزيمات الليغاز.
يسهل قرب البروتينات المتفاعلة ارتباط الموصل بالمجسات. ثم يسد Ligase الفجوات ، مما يؤدي إلى إنشاء حمض نووي دائري.
اغسل أي موصلات غير مرتبطة.
احتضان بمحلول تضخيم يحتوي على البوليميراز ، والذي يضخم الحمض النووي الدائري من خلال تضخيم الدائرة المتدحرجة.
مجسات الكاشف الموسومة بالفلوروفور في المحلول الصلب للحمض النووي المضخم ، وعند الإثارة تنتج إشارة فلورسنت.
قم بتركيب جدار الجسم على شريحة لتصور تفاعلات البروتين والبروتين المسمى بالفلورسنت في NMJ.
لبدء الفحص ، أضف 1 إلى 5 تخفيف في حجم إجمالي لا يقل عن 200 ميكرولتر لكل من مسبار جيش التحرير الشعبى الصينى المضاد للفأر ناقص ومسبار جيش التحرير الشعبى الصينى المضاد للأرانب بالإضافة إلى 1٪ BSA إلى جدران الجسم. احتضن لمدة ساعتين عند 37 درجة
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية