موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:42 دقيقة • July 8th, 2025
ضع الميتوكوندريا المعزولة من خلايا الورم الأرومي العصبي في مخزن مؤقت يحتوي على صبغة فلورية غير منفذة للغشاء ومرتبطة بالكالسيوم.
احتضان للسماح للميتوكوندريا بالاستقرار في المخزن المؤقت.
أضف المخزن المؤقت المحتوي على الكالسيوم واحتضنه مع الرج.
ترتبط أيونات الكالسيوم بجزيئات الصبغة ، مما يتسبب في تألقها.
باستخدام مطياف التألق ، راقب مضان الصبغة في الوقت الفعلي.
الآن ، قم بحقن المخزن المؤقت المحتوي على الكالسيوم على فترات منتظمة.
يعزز تركيز الكالسيوم المتزايد امتصاص الكالسيوم في الميتوكوندريا ، مما يقلل من أيونات الكالسيوم الحرة المتاحة للارتباط بالصبغة ، مما يؤدي إلى انخفاض الفلورة.
بمجرد أن تصل الميتوكوندريا إلى أقصى سعة لتخزين الكالسيوم ، تؤدي إضافة الكالسيوم الإضافية إلى فتح المسام الانتقالية لنفاذية الميتوكوندريا (mPTP).
تطلق فتحة المسام هذه الكالسيوم من الميتوكوندريا إلى المخزن المؤقت ، حيث ترتبط بالصبغة وتسبب زيادة التألق.
تحديد الكمية الإجمالية للكالسيوم المطلوبة للحث على فتح mPTP ، مما يعكس قدرة الاحتفاظ بالكالسيوم في الميتوكوندريا.
قم بإعداد وسط كلوريد البوتاسيوم وأضف صبغة الفلورسنت الخضراء المرتبطة بالكالسيوم إلى تركيز نهائي يبلغ 0.5 ميكرومولار قبل التجربة. لتحديد قدرة الاحتفاظ بالكالسيوم في الميتوكوندريا ، قم أولا بنقل 1 ملليلتر من الميتوكوندريا المعزولة في وسط كلوريد البوت
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية