توليد نموذج كروي ثلاثي الأبعاد لغزو الخلايا السرطانية

خذ ثقافة خلايا ورم الدماغ البشري.

تعامل مع إنزيم التفكك لتعطيل تقاطعات الخلايا وفصل الخلايا المجمعة.

اغسل بمخزن مؤقت لإيقاف نشاط الإنزيم، ثم أضف وسيطا مزروقا للحفاظ على صلاحية الخلية.

أدخل ميثيل السليلوز، وهو عامل تعليق.

انقل التعليق إلى صفيحة دقيقة مستديرة القاع واحتضنها.

يحافظ ميثيل السليلوز اللزج على الخلايا معلقة ، مما يعزز تفاعلات الخلية الخلوية للتجميع في كرويات.

امزج الكرويات مع مصفوفة الكولاجين التي تحاكي البيئة الفسيولوجية خارج الخلية.

انقل التعليق إلى صفيحة دقيقة واحتضانها ، مما يسمح للمصفوفة بتكوين هلام يحبس الكرويات.

أضف وسط النمو أعلى الجل.

في المحيط الكروي، تفقد الخلايا السرطانية التصاق الخلايا الخلوية وتعتمد نمطا ظاهريا غازيا.

تفرز هذه الخلايا البروتياز لتحلل المصفوفة ، وتمديد النتوءات لترسيخ نفسها ، والمضي قدما ، وغزو المصفوفة.

النموذج الكروي الذي يظهر غزو الورم جاهز للتحليل.

لتوليد كرويات ورمية متجانسة الحجم ، اغسل أولا ثقافة الخلايا السرطانية ذات الأهمية ب 5 ملليلتر من PBS ، وعالج الخلايا ب 0.5 إلى 1 مليلتر من إنزيم التفكك. بعد 5 دقائق عند 37 درجة مئوية ، أوقف التفاعل ب 4 إلى 4.5 مل من PBS ، وانقل الخلايا المنفصلة إلى أنبوب مخروطي سعة 15 مليلتر ، يحتوي على 10 ملليلتر من وسط النمو الكامل.

بعد العد ، قم بإعادة تعليق الخلايا عند 1 في 10 إلى 6 خلايا لكل 8 ملليلتر من وسط النمو الكامل ، مع استكمالها ب 2 ملليلتر من تركيز ميثيل السليلوز بنسبة 2٪ ، ونقل المعلق إلى حاوية نظام معقمة. بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من الخلايا إلى كل بئر من صفيحة قاعية مستديرة 96 جيدا وضع اللوحة في حاضنة 37 درجة مئوية ، 5٪ من ثاني أكسيد الكربون لمدة ثلاثة إلى أربعة أيام.

لإجراء فحص الغزو ، عندما تكون الخلايا السرطانية قد شكلت كرويات بحجم موحد ، انقل كل بنية خلية إلى أنبوب سعة 500 ميكرولتر ، واغسل الكرات مرة واحدة باستخدام 200 ميكرولتر من PBS. بعد الغسيل الثاني ، انقل الكرويات بعناية إلى 100 ميكرولتر من مصفوفة الكولاجين المعدة حديثا ، وأضف كل معلق كروي في وسط كل بئر من صفيحة 96 بئر مسطحة القاع.

بعد حضانة لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية ، أضف 100 ميكرولتر من وسط النمو الكامل فوق الجل في كل بئر.

تأكد من وضع جميع الكرات في وسط كل بئر للحصول على أفضل تصوير لغزو الخلايا السرطانية.