توليد نموذج كروي ثلاثي الأبعاد لغزو الخلايا السرطانية

خذ ثقافة خلايا ورم الدماغ البشري.

تعامل مع إنزيم التفكك لتعطيل تقاطعات الخلايا وفصل الخلايا المجمعة.

اغسل بمخزن مؤقت لإيقاف نشاط الإنزيم، ثم أضف وسيطا مزروقا للحفاظ على صلاحية الخلية.

أدخل ميثيل السليلوز، وهو عامل تعليق.

انقل التعليق إلى صفيحة دقيقة مستديرة القاع واحتضنها.

يحافظ ميثيل السليلوز اللزج على الخلايا معلقة ، مما يعزز تفاعلات الخلية الخلوية للتجميع في كرويات.

<p style='margin-left:'36pt;'>امزج الكرويات مع مصفوفة الكولاجين التي تحاكي البيئة الفسيولوجية خارج الخلية.

انقل التعليق إلى صفيحة دقيقة واحتضانها ، مما يسمح للمصفوفة بتكوين هلام يحبس الكرويات.

أضف وسط النمو أعلى الجل.

في المحيط الكروي، تفقد الخلايا السرطانية التصاق الخلايا الخلوية وتعتمد نمطا ظاهريا غازيا.

تفرز هذه الخلايا البروتياز لتحلل المصفوفة ، وتمديد النتوءات لترسيخ نفسها ، والمضي قدما ، وغزو المصفوفة.

النموذج الكروي الذي يظهر غزو الورم جاهز للتحليل.

لتوليد كرويات ورمية متجانسة الحجم ، اغسل أولا ثقافة الخلايا السرطانية ذات الأهمية ب 5 ملليلتر من PBS ، وعالج الخلايا ب 0.5 إلى 1 مليلتر من إنزيم التفكك. بعد 5 دقائق عند 37 درجة مئوية ، أوقف التفاعل ب 4 إلى 4.5 مل من PBS ، وانقل الخلايا المنفصلة إلى أنبوب مخروطي سعة 15 مليلتر ، يحتوي على 10 ملليلتر من وسط النمو الكامل.

بعد العد ، قم بإعادة تعليق الخلايا عند 1 في 10 إلى 6 خلاي