الكشف عن البروتين المرتبط بالأمراض التنكسية العصبية α-Synuclein باستخدام ELISA
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 4:37 دقيقة • April 28th, 2025
ابدأ بأنسجة المخ من فأر معدل وراثيا يفرط في التعبير عن α-synuclein المتحور ، وهو بروتين عصبي غير مطوي مرتبط بمرض تنكسي عصبي ، مغمور في مخزن مؤقت عالي الملح.
قم بتجانس الأنسجة بمدقة كبيرة ، متبوعة بمدقة صغيرة لتعطيل الأنسجة وإطلاق البروتينات داخل الخلايا ، بما في ذلك α-سينوكلين.
نقل المتجانس إلى أنبوب وجهاز طرد مركزي. اجمع المادة الطافية المحتوية على البروتين وقم بتخفيفها بمخزن مؤقت.
أضف هذا المادة الطافية إلى صفيحة دقيقة مطلية بالأجسام المضادة الخاصة بالسينوكلين α المعالجة مسبقا بعامل مانع لمنع الارتباط غير المحدد.
احتضان مع التحريض ، مما يسمح للارتباط α-synuclein الطبيعي والمتحور.
اغسل اللوحة ، ثم أضف الأجسام المضادة للكشف الخاصة ب α-synuclein المتحور واحتضنه بالتحريض.
اغسل مرة أخرى وأضف الأجسام المضادة المرتبطة بالإنزيم ، متبوعا بالحضانة تحت التحريض.
أضف الركيزة واحتضانها في الظلام تحت التحريض. تتفاعل الركيزة مع الإنزيم لإنتاج تغيير في اللون.
أوقف التفاعل بالحمض وقم بقياس الامتصاص لتحديد α-synuclein المتحور.
لتحضير متجانسات الدماغ ، أضف حجما مناسبا من المخزن المؤقت ل HS إلى مناطق الدماغ التي تم تشريحها للوصول إلى نسبة مئوية متوقعة من التجانس ، كما هو موضح في الجدول أدناه. باستخدام مطحنة الأنسجة المكونة من أنبوب زجاجي من البورسليكات ومدقتين ، A و B ، اسكب منطقة في الدماغ ليتم سحقها في الأ
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية