الكشف عن البروتين المرتبط بالأمراض التنكسية العصبية α-Synuclein باستخدام ELISA

0 مشاهدات4:37 د • April 28th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ابدأ بأنسجة المخ من فأر معدل وراثيا يفرط في التعبير عن α-synuclein المتحور ، وهو بروتين عصبي غير مطوي مرتبط بمرض تنكسي عصبي ، مغمور في مخزن مؤقت عالي الملح.

قم بتجانس الأنسجة بمدقة كبيرة ، متبوعة بمدقة صغيرة لتعطيل الأنسجة وإطلاق البروتينات داخل الخلايا ، بما في ذلك α-سينوكلين.

نقل المتجانس إلى أنبوب وجهاز طرد مركزي. اجمع المادة الطافية المحتوية على البروتين وقم بتخفيفها بمخزن مؤقت.

أضف هذا المادة الطافية إلى صفيحة دقيقة مطلية بالأجسام المضادة الخاصة بالسينوكلين α المعالجة مسبقا بعامل مانع لمنع الارتباط غير المحدد.

احتضان مع التحريض ، مما يسمح للارتباط α-synuclein الطبيعي والمتحور.

اغسل اللوحة ، ثم أضف الأجسام المضادة للكشف الخاصة ب α-synuclein المتحور واحتضنه بالتحريض.

اغسل مرة أخرى وأضف الأجسام المضادة المرتبطة بالإنزيم ، متبوعا بالحضانة تحت التحريض.

أضف الركيزة واحتضانها في الظلام تحت التحريض. تتفاعل الركيزة مع الإنزيم لإنتاج تغيير في اللون.

أوقف التفاعل بالحمض وقم بقياس الامتصاص لتحديد α-synuclein المتحور.

لتحضير متجانسات الدماغ ، أضف حجما مناسبا من المخزن المؤقت ل HS إلى مناطق الدماغ التي تم تشريحها للوصول إلى نسبة مئوية متوقعة من التجانس ، كما هو موضح في الجدول أدناه. باستخدام مطحنة الأنسجة المكونة من أنبوب زجاجي من البورسليكات ومدقتين ، A و B ، اسكب منطقة في الدماغ ليتم سحقها في الأنبوب. ثم باستخدام المدقة أ ، قم بتجانس الأنسجة 10 مرات لفصلها.

ثم قم بالتبديل إلى المدقة B وقم بتجانس 20 مرة إضافية. باستخدام ماصة النقل ، انقل الجانس إلى أنبوب سعة 1.5 مل ، مع تكرار التجانس مع عينات الدماغ المتبقية. الطرد المركزي للعينات عند 1,000 غرام لمدة خمس دقائق ، عند أربع درجات مئوية. ثم اجمع المواد الطافية وقسمها إلى حصص 200 ميكرولتر.

باستخدام 100 ميكرولتر من محلول طلاء الجسم المضاد ، قم بتغطية آبار 96 صفيحة دقيقة واحتضانها عند أربع درجات مئوية طوال الليل. في اليوم التالي ، أضف 300 ميكرولتر من PBST إلى الآبار ، واستخدم غسالة الألواح لغسل الألواح خمس مرات. أثناء العمل في درجة حرارة الغرفة ، للمضي قدما ، أضف 200 ميكرولتر من المخزن المؤقت الذي يحجب T20 PBS إلى كل بئر ، وقم بهز الألواح عند 150 دورة في الدقيقة لمدة ساعة واحدة قبل استخدام PBST لغسل الألواح خمس مرات.

باستخدام PBST ، 1٪ من BSA ، قم بتخفيف تجانس الدماغ باستخدام الإرشادات المدرجة هنا. وأضف 100 ميكرولتر إلى كل بئر. ثم احتضن في درجة حرارة الغرفة و 150 دورة في الدقيقة لمدة ساعتين قبل استخدام PBST لغسل الأطباق خمس مرات.

بعد الغسيل النهائي ، أضف الأجسام المضادة اللازمة للكشف عن ألفا سينوكلين المخففة في PBST و 1٪ BSA كما هو موضح في الجدول الثاني من بروتوكول النص. احتضن في درجة حرارة الغرفة و 150 دورة في الدقيقة لمدة ساعة واحدة قبل غسل الأطباق خمس مرات كما كان من قبل.

بعد ذلك ، أضف إما مضاد للفأر أو مضاد للأرانب IGG HRP مقترف إلى 1 إلى 8,000 في PBST ، 1٪ BSA. واحتضن عند 150 دورة في الدقيقة لمدة ساعة واحدة قبل غسل الأطباق خمس مرات. ثم أضف 100 ميكرولتر من محلول TMB إلى كل بئر ، واحتضنه عند 150 دورة في الدقيقة لمدة 15 دقيقة في الظلام. أوقف التفاعل بإضافة 100 ميكرولتر من حمض الهيدروكلوريك العادي لكل بئر. بعد ذلك ، استخدم قارئ الصفيحة الدقيقة لقياس الامتصاص عند 450 نانومتر.

09:27

استخراج متتابعة من القابلة للذوبان وغير القابلة للذوبان ألفا Synuclein من أدمغة الشلل الارتعاشي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:32

التصوير تلألؤ بيولوجي من Neuroinflammation في الفئران المعدلة وراثيا بعد الطرفية تلقيح ألفا Synuclein الألياف

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:44

جيل من الورم الليفي الفا Synuclein المكونة مسبقا من مونومرات واستخدامها في فيفو

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

01:30

الكشف عن ألفا سينوكلين الفسفوري باستخدام النشاف الغربي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

04:09

مقايسة التألق المناعي للكشف عن مجاميع ألفا سينوكلين في قسم خزعة الجلد

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:25

التلوين المناعي للخلايا العصبية المعالجة بمجاميع ألفا سينوكلين

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:01

الكشف عن الأمراض المرتبطة α-synuclein التي كتبها المحسن ELISA في دماغ الفئران المعدلة وراثيا Overexpressing A53T الإنسان تحور α-synuclein

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:08

إنتاجية عالية، تعدد والمستهدفة [بروتيوميك CSF الفحص لقياس المؤشرات الحيوية الاعصاب وئي E الإسوية الحالة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:16

إدارة خارجية من المجاميع المرتبطة ميكروسوميس ألفا-سينوكلين إلى الخلايا العصبية الأولية كنموذج خلية قوية لتشكيل ييفات

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:33

استهداف المجاميع ألفا سينوكلين في ألياف الأعصاب الطرفية الجلدية عن طريق اختبار المناعة العائمة الحرة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 22 أغسطس 2026