التصوير القائم على الكيمياء الخلوية المناعية لتصور هجرة خلايا الورم الدبقي لدى الأطفال

ابدأ بلوحة مسطحة القاع متعددة الآبار مغطاة بمصفوفة غشاء القاعدية ، والتي تحتوي على بوليمر خارج الخلية وبروتينات الالتصاق التي تحاكي مصفوفة البيئة المكروية للورم.

أدخل وسيطا يحتوي على غلاف عصبي من خلايا الورم الدبقي المشتقة من ورم في الدماغ لدى الأطفال، مما يضمن وضعه مركزيا في البئر.

تعزز المصفوفة ارتباط الغلاف العصبي بالبئر.

add a hypopressor to reduce non-specified polyescence.

بعد ذلك، أدخل الأجسام المضادة المضادة ل CD44 المترافقة بالفلوروفور الأخضر.

انقل اللوحة إلى نظام تصوير للخلايا الحية موجود داخل حاضنة تحافظ على الظروف الفسيولوجية للخلية.

بمرور الوقت، تعبر خلايا الورم الدبقي عن بروتين التصاق الخلية CD44، الذي يتفاعل مع بروتينات الالتصاق.

هذا ينشط مسار إشارات الخلية ويسهل هجرة الخلايا من الغلاف العصبي.

ترتبط الأجسام المضادة المضادة ل CD44 المترافقة بالفلوروفور ب CD44 المعبر عنها على خلايا الورم الدبقي ، مما يجعلها تتألق.

يؤكد ظهور الخلايا الفلورية الخضراء التي تتحرك بعيدا عن الغلاف العصبي هجرة خلايا الورم الدبقي.

بمجرد طلاء الآبار ب BMM ، قم بقص طرف P200. خذ 50 ميكرولترا من وسط الخلية و NS من كل بئر محدد ، وانقله إلى بئر سفلي مسطح ومغلف. تحقق من وجود وموضع NS في كل بئر بصريا. أضف برفق 50 ميكرولترا من الجسم المضاد BSR و ALR المخفف إلى كل بئر ، وانتظر لمدة دقيقتين إلى ثلاث دقائق للسماح للكواشف بالاختلاط. وباستخدام مجهر مقلوب ، تأكد من أن معظم NS المكرر يقع في موقع مركزي في البئر. بعد التأكد من عدم وجود أي فقاعة ، انقل اللوحة برفق في أداة تحليل الخلية الحية كما هو موضح سابقا.

في برنامج أداة تحليل الخلايا الحية، حدد الخيار Schedule To Acquisition. ثم انقر فوق علامة التبويب علامة الجمع وحدد المسح الضوئي حسب الجدول الزمني لمسح اللوحات ضوئيا بفواصل زمنية كما هو مذكور في المخطوطة النصية. في نافذة البرنامج ، قم بإنشاء أو استعادة السفينة ، ثم انقر فوق الخيار جديد. حدد نوع فحص استنساخ التخفيف والهدف 4X والطور والأخضر لمقايسة الترحيل. حدد نوع اللوحة وحدد الآبار المراد مسحها ضوئيا عن طريق تمييزها على خريطة اللوحة. ثم قم بإعداد تردد المسح. انقر فوق إضافة إلى الجدولة وابدأ الفحص.