JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 3:28 د • April 28th, 2025
خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على خلايا شبيهة بالخلايا الدبقية الصغيرة تظهر نشاطا بلعمة.
احتضن مع وصمة عار نووية لتسمية النوى.
add a hibil polymerization actin to the negative control well.
أثناء الحضانة، يرتبط المثبط بخيوط الأكتين، مما يثبط بلمرة الأكتين والبلعمة.
حافظ على اللوحة في درجات حرارة منخفضة وأضف المشابك العصبية المسماة بالصبغة الحساسة للأس الهيدروجيني - شظايا معزولة من المحطات المشبكية العصبية.
طرد مركزي اللوحة في درجات حرارة منخفضة لتعزيز تفاعلات الخلايا المشابك مع منع الامتصاص المبكر.
نمطنقل اللوحة إلى نظام تصوير الخلية الحية.
في بئر الاختبار، تكون الجسيمات المشابكة البلعمية وتندمج مع الجسيمات الحالة التي تشكل الجسيمات البلعمة. تعمل البيئة الحمضية الليزوزومية على تنشيط الصبغة ، مما يؤدي إلى تألقها.
بمرور الوقت، في بئر الاختبار، يتم ابتلاع المزيد من الجسيمات المشابكة مما يؤدي إلى زيادة أخرى في التألق.
ومع ذلك، في بئر التحكم السلبي، يتم تثبيط بلمرة الأكتين، مما يمنع امتصاص الجسيم المشبكي. يؤكد الحد الأدنى من التألق الناتج اعتماد التألق على البلعمة بوساطة الأكتين.
في يوم الفحص ، قم بإزالة 40 ميكرولترا من الوسط لكل بئر ، وأضف 10 ميكرولترات من محلول التلوين النووي. احتضن الطبق لمدة ساعتين. قم بإذابة المشابك المسماة على الجليد وصوتنة برفق باستخدام مكبر صوت مائي لمدة دقيقة واحدة. مرة أخرى ، ضع الجسيمات المشابكة على الفور على الجليد. قم بتخفيف المشابك العصبية المسماة ووسط IMG الكامل عند 1 ميكرولتر من المشابك العصبية لكل 50 ميكرولتر من الوسط.
للتحكم السلبي ، قم بإعداد 60 ميكرومولار سيتوكالاسين D في وسط IMG الكامل لتثبيط بلمرة الأكتين ، وبالتالي البلعمة. ثم أضف 10 ميكرولترات من هذا المحلول إلى كل بئر للحصول على تركيز نهائي يبلغ 10 ميكرومولار واحتضنه لمدة 30 دقيقة. أخرجي الطبق من الحاضنة واحتضنه على حرارة 10 درجات مئوية لمدة 10 دقائق. حافظ على اللوحة على الجليد وأضف 50 ميكرولترا من الوسط الذي يحتوي على المشابك العصبي.
الطرد المركزي للوحة عند 270 مرة جم لمدة ثلاث دقائق عند 10 درجات مئوية وحافظ على اللوحة على الجليد حتى الحصول على التصوير. أدخل اللوحة في قارئ تصوير الخلايا الحية وحدد الآبار المراد تحليلها. ثم حدد عدسة موضوعية 20x. بعد ذلك ، اضبط وقت تكامل شدة الصمام الثنائي الباعث للضوء أو وقت تكامل شدة LED وكسب المجال الساطع والقنوات الزرقاء. يجب أن يكون مضان المشبك العصبي ضئيلا في النقطة الزمنية الأولية.
حدد عدد المربعات الفردية التي سيتم الحصول عليها في مونتاج لكل بئر. احصل على 16 بلاطة في وسط البئر ، وتصوير ما يقرب من 5٪ من إجمالي مساحة البئر. اضبط درجة الحرارة على 37 درجة مئوية والفاصل الزمني المطلوب للتصوير.
تتقصى هذه الدراسة النشاط البلعامي للخلايا الشبيهة بالخلايا الدبقية الصغيرة باستخدام نظام تصوير الخلايا الحية. ويتم تحليل تأثيرات تثبيط بلمرة الأكتين على امتصاص الجسيمات المشبكية لفهم آليات البلعمة.
توفر اختبارات البلعمة الكمية للخلايا الحية باستخدام السينابتوسومات البشرية والخلايا الشبيهة بالخلايا الدبقية الصغيرة منصة قوية لاستقصاء الآليات المناعية العصبية ذات الصلة بمسارات الأمراض التنكسية العصبية. يتيح هذا النهج تقليل المخاطر الميكانيكية والتحقق من صحة الأهداف عن طريق عزل وظيفة البلعمة المعتمدة على الأكتين في نظام ذي صلة بالبشر. كما يدعم هذا الاختبار الثقة التنبؤية لاتخاذ القرارات المتعلقة بالمحافظ البحثية في المراحل المبكرة من أبحاث الالتهاب العصبي والحفاظ على المشابك العصبية.
يقع هذا المقايسة للخلايا الحية ضمن التسلسل الممتد من الاكتشاف المبكر إلى تحديد المركبات الرائدة، مما يوفر بيانات قابلة للتنفيذ للتحقق من الهدف والدراسات الميكانيكية في علم الأحياء العصبي.
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
آخر تحديث: 29 أغسطس 2026