موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:06 دقيقة • April 28th, 2025
خذ شبكية العين الثابتة كيميائيا معزولة من عين الفئران.
تظهر العين أضرارا ناتجة عن الحرارة في الضفيرة الوعائية الداكنة الطرفية، وهي شبكة من الأوعية الدموية المحيطة بالقرنية.
يمنع هذا الضرر تصريف السوائل ، مما يزيد من ضغط العين (IOP) ويسبب تنكس الخلايا العقدية الشبكية (RGC).
عالج شبكية العين بمحلول نفاذية لاختراق الخلية والأغشية النووية.
تطبيق محلول حجب لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة.
قم بإزالة حل الحظر.
أدخل الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف عامل النسخ الذي يتم التعبير عنه في الغالب في RGCs.
Wash لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
إدخال الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالفلوروفور التي ترتبط بالأجسام المضادة الأولية.
Wash لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
قم بتلطيخ النوى بصبغة ملزمة للحمض النووي.
اغسل شبكية العين وقم بتثبيتها على شريحة زجاجية باستخدام وسيط تركيب مناسب.
تصور شبكية العين تحت المجهر اللامع الفلوري.
انخفاض كثافة الخلايا في العين التالفة مقارنة بعنصر التحكم يؤكد تنكس RGC بسبب زيادة IOP.
بعد عزل شبكية العين ، انقلها إلى صفيحة مزرعة مكونة من 24 بئرا تحتوي على 1 مليلتر PBS ، مع إبقاء شبكية العين الداخلية متجهة لأعلى. قم باختراق الأنسجة عن طريق غسلها باستخدام خافض للتوتر السطحي غير أيوني بنسبة 0.5٪ مخفف في PBS. ثم قم باحتضان الأنسجة في محلول مانع لمدة ساعة واحدة في
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية