تقييم مستويات الناقل العصبي الضثاري في الفئران الناجمة عن الصرع المزمن

خذ فأرا مسيطرا ومخططا للصرع المزمن مزروعا بقنية إرشادية وقطب كهربائي للدماغ في الحصين.

يزيد تحريض الصرع من إطلاق الناقل العصبي الاستثاري ، مما يتسبب في تدفق الأيونات إلى خلايا ما بعد المشبكي ، مما يولد إمكانات استثارية مستمرة. هذا يؤدي إلى رشقات نارية متزامنة من النشاط الكهربائي ، تسمى النوبات ، المسجلة باستخدام القطب.

أدخل مسبار غسيل الكلى المجهري بغشاء شبه منفذ في القنية.

ربط الجرذ بقفص نظام تسجيل مخطط كهربية الدماغ.

قم بغرس عازل فسيولوجي في أنسجة المخ عبر مدخل المسبار.

تأكد من عدم وجود نوبة وجمع السائل خارج الخلية عبر مخرج المسبار لتقييم مستويات الناقل العصبي.

يشير المستوى القاعدي المرتفع في الفئران المصابة بالصرع إلى زيادة بوساطة الصرع.

قم بغرس مخزن مؤقت عالي من البوتاسيوم وتذكر العينات.

تؤدي زيادة البوتاسيوم إلى إطالة استثارة الخلايا العصبية، مما يؤدي إلى إطلاق ناقل عصبي مستمر.

يشير الارتفاع المؤقت في مستويات الناقل العصبي في كل من الفئران المصابة بالصرع والفئران الضابطة إلى زيادة عالية ناتجة عن البوتاسيوم.

ابدأ بإعداد مجسات غسيل الكلى المجهري للاستخدام الأول وفقا لدليل المستخدمين المصنعين واملأها بمحلول الرنين. بعد ذلك ، قم بقص قطع بطول 10 سم من أنابيب FEP ، وقم بتوصيلها بقنيات مدخل ومخرج المسبار ، باستخدام محولات الأنابيب بألوان مختلفة. تأكد من أن الأنبوب يلامس المحولات مع عدم وجود مساحة ميتة في جميع التوصيلات.

قم بإزالة القنية الوهمية من دليلها باستخدام الملقط عن طريق إمساك رأس بإحكام. أدخل مسبار غسيل الكلى المجهري في قنية التوجيه ، واستخدم طين النمذجة لزيادة شد القنية. بعد ذلك ، قم بتوصيل بنظام تسجيل EEG المربوط. ثم ضع في أسطوانة زجاجي واتركه يستكشف البيئة الجديدة. اتبع حركات الفئران المستيقظة والحركة.

بعد ذلك ، قم بتوصيل مدخل المسبار بحقنة سعة 2.5 مل بإبرة ضعيفة عيار 22 تحتوي على محلول جرس باستخدام محولات الأنابيب. ادفع ملليلترا واحدا من محلول الرنين في المسبار في 10 ثوان عن طريق دفع مكبس المحقنة سعة 2.5 مل باستمرار. تحقق من ظهور قطرة السائل على المخرج للدلالة على أن المسبار جاهز للاستخدام. أخيرا ، املأ المحاقن سعة 2.5 مل متصلة بأنبوب FEP عن طريق محولات الأنابيب بمحلول الرنين وقم بتثبيتها على مضخة التسريب. ابدأ المضخة بمعدل ميكرولتر في الدقيقة واتركها تعمل طوال الليل.

بعد التحقق عبر تسجيلات مخطط كهربية الدماغ بالفيديو ، وعدم وجود نوبات في الساعات الثلاث السابقة لجمع العينات ، أوقف المضخة التي تحمل أنابيب FEP المحاقن المقنفة المملوءة بمحلول الرنين. قم بتركيب مجموعة أخرى من المحاقن سعة 2.5 ملليلتر متصلة بأنابيب FEP مع محولات الأنابيب المملوءة بمحلول جرس معدل يحتوي على محلول بوتاسيوم 100 ملليمول. ابدأ المضخة بمعدل 2 ميكرولتر في الدقيقة واتركها تعمل. تحقق من عدم وجود فقاعات هواء في النظام ، وتأكد من أن الأنبوب يلامس المحولات بدون مساحة ميتة في جميع التوصيلات.

بعد ذلك ، تحقق من ظهور قطرة السائل على المخرج للإشارة إلى متى يكون المسبار جاهزا للاستخدام. بعد ذلك ، قم بتوصيل أنبوب FEP من المحاقن المملوءة بمحلول الرنين بقنية مدخل المسبار في كل ، وانتظر ظهور قطرة السائل على طرف المخرج. قم بتوصيل مخرج المسبار بأنبوب FEP ، مما يؤدي إلى التجميع في أنبوب الاختبار.

أدخل أنبوب FEP في أنبوب الاختبار المغلق 0.2 مل بغطاء مثقوب. وتأكد من بقاء الأنبوب في مكانه عن طريق تثبيته بقطعة من طين النمذجة. بعد تشغيل المضخة بمعدل 2 ميكرولتر في الدقيقة لمدة 60 دقيقة دون جمع عينات لتحقيق التوازن ، يقوم النظام بجمع خمس عينات متتالية من غسيل الكلى لمدة 30 دقيقة في ظل ظروف خط الأساس. وتخزين العينات على الثلج.

بعد 10 دقائق ، قم بتبديل الأنبوب من المحاقن التي تحتوي على محلول رنين البوتاسيوم 100 مللي مولار إلى محلول الرنين العادي واترك المضخة تعمل. بعد جمع غسيل الكلى بعد التوازن الخامس ، اجمع 20 ميكرولتر من أجزاء غسيل الكلى كل 10 دقائق لمدة ساعة واحدة. ثم اجمع ثلاث عينات إضافية من غسيل الكلى لمدة 30 دقيقة وأوقف المضخة. أخيرا ، قم بتخزين العينات عند 80 درجة مئوية تحت الصفر بعد التجربة حتى تحليل HPLC.