تصوير عالي الدقة لمستقبلات الناقلات العصبية في نقاط الاشتباك العصبي في شبكية العين

خذ قسما لشبكية الفأر على شبكة المجهر الإلكتروني. يحتوي القسم على خلايا عقدية شبكية العين ، أو RGCs ، مرتبطة بشكل متشابك بالخلايا ثنائية القطب.

تحتوي الخلايا ثنائية القطب قبل المشبكي على حويصلات ناقل عصبي مرتبة في بنية شريطية بالقرب من الغشاء المشبكي.

تعرض RGCs بعد المشبكي مستقبلات الناقل العصبي العنقودية على غشاءها. يتم تصنيف هذه الخلايا بالوحدة الفرعية لتوكسين الكوليرا B أو CTB.

يغسل بمخزن مؤقت للحفاظ على الرقم الهيدروجيني.

احتضان مع مخزن مؤقت محظور لإخفاء مواقع الربط غير المحددة.

احتضان الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف مستقبلات الناقل العصبي و CTB.

يغسل بمخزن مؤقت لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة والحفاظ على درجة الحموضة.

احتضان الأجسام المضادة الثانوية المترافقة مع جزيئات الذهب النانوية ذات الأحجام المختلفة ، والتي ترتبط بالأجسام المضادة الأولية ، ووضع علامات على الجزيئات المستهدفة.

قم بإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة ، ثم جفف العينة بالهواء.

ضع المعادن الثقيلة التي تربط الجزيئات الكبيرة ، مما يعزز التباين.

باستخدام المجهر الإلكتروني ، حدد RGCs باستخدام CTBs المسمى وحدد موقع مستقبلات الناقل العصبي المسمى.

في هذه الخطوة ، قم بقص أقسام رقيقة للغاية بسمك 70 نانومتر باستخدام ميكروتوم فائق الصغر وجمعها على شبكات النيكل المطلية بالكربون من فورمفار. اغسل الشبكات بالماء المقطر مرة وا