تقييم سلامة الحاجز الدموي الدماغي في نموذج فئران إصابات الدماغ الناجم عن الليزر

خذ فأرا مخدرا ونموذجا لإصابة الدماغ الناجم عن الليزر.

أدى تطبيق الليزر على نصف الكرة الأيمن إلى تلف الخلايا والحاجز الدموي الدماغي ، أو BBB ، الذي يفصل الدم عن أنسجة المخ.

حقن صبغة تتبع في وريد الذيل المقنن الذي ينتقل عبر الدورة الدموية الجهازية للوصول إلى الدماغ.

ترتبط الصبغة ببروتينات البلازما وتتسرب إلى أنسجة المخ من خلال BBB التالف.

قتل الفئران.

قم بتحريك الفئران عبر القلب لإزالة الصبغة من الدورة الدموية.

استخرج الدماغ وقطعه إلى شرائح ، وعزل الشرائح من نصف الكرة المصاب ، وقم بتجانسها.

عالج بمحلول حمضي لتشويه البروتينات ، وإطلاق الصبغة المرتبطة بالبروتين.

الطرد المركزي وعزل المادة الطافية المحتوية على الصبغة. أضف الكحول لتعزيز مضان الصبغة.

نقل المحلول إلى صفيحة دقيقة. عند الإثارة ، تشير شدة التألق الأعلى في الدماغ المصاب إلى تلف BBB الناجم عن الليزر.

لتقييم حدوث كسر الحاجز الدموي الدماغي ، بعد 24 ساعة من الإصابة الناجمة عن الليزر ، قم بتحميل حقنة بصبغة إيفانز الزرقاء بنسبة 2٪ ، مخففة في 4 ملليلتر لكل كيلوغرام من المحلول الملحي ، وتوصيل المحلول عن طريق الوريد إلى المصابين والسيطرة على الفئران عبر وريد الذيل المقن.

اترك المحلول يدور لمدة ساعة واحدة ، قبل استخدام مجموعات الدبابيس الجراحية والمقص لفتح صدر الأول. قم بنشر القلب المكشوف ، مع محلول ملحي مبرد بنسبة 0.9٪ عبر البطين الأيسر عند ضغط 110 ملم من الزئبق ، حتى يتم ملاحظة سائل نضح عديم اللون من الأذين الأيمن.

بعد ذلك ، احصد الدماغ ، واحصل على شرائح منقر 2 ملم. افصل شرائح الدماغ اليسرى عن شرائح الدماغ اليمنى للسماح بتقييم نصفي الكرة الأرضية المصابين وغير المصابين بشكل منفصل ، ووزن العينات. تجانس العينات باستخدام الهاون والمدقة واحتضان عينات الأنسجة في 50٪ حمض ثلاثي كلورو أسيتيك لمدة 24 ساعة.

في اليوم التالي ، تم طرد عينات أنسجة المخ المتجانسة ، لمدة 20 دقيقة عند 10,000 مرة جم ودرجة حرارة الغرفة. امزج 1 مليلتر من المادة الطافية مع 1.5 مل من 96٪ إيثانول بنسبة 1 إلى 3. بعد ذلك ، استخدم كاشف التألق عند إثارة 620 نانومتر وطول موجي انبعاث 680 نانومتر لتقييم كسر الحاجز الدموي الدماغي.