موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:56 دقيقة • April 28th, 2025
ابدأ بقسم دماغ الرئيسيات غير البشرية الثابت كيميائيا.
يربط البروتينات المثبتة القائمة على الألدهيد ، مما يحافظ على بنية الأنسجة ، ولكنه يترك بعض بقايا الألدهيد التفاعلية.
اغسل لإزالة طبقة الواقي من الفراغ بالتبريد المحيطة بقسم الأنسجة.
أضف عاملا مختزلا لتحييد مجموعات الألدهيد التفاعلية ، مما ينتج عنه منتجات ثانوية للتفاعل.
اغسل لإزالة هذه المنتجات الثانوية وعوامل التقليل الزائدة.
ضع محلول مانع لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحدد.
أضف الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف بروتينا معبرا عنه في مواقع محددة على الغشاء العصبي.
اغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
أضف الأجسام المضادة الثانوية البيوتينيل التي تستهدف الأجسام المضادة الأولية.
اغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
تراكب بمجمعات أفيدين-بيوتين-بيروكسيداز التي ترتبط بالأجسام المضادة الثانوية.
يغسل مرة أخرى لإزالة المجمعات غير المرتبطة.
أدخل ركيزة كروموجينيك مع بيروكسيد الهيدروجين. في وجود بيروكسيد الهيدروجين ، يؤكسد إنزيم البيروكسيديز الركيزة ، مكونا رواسب بنية.
ابدأ بنقل أقسام بسمك 50 ميكرون من دماغ الرئيسيات غير البشري الثابت ، والتي تحتوي على منطقة الاهتمام إلى صفيحة مكونة من 12 بئرا تحتوي على PBS. اغسل الأقسام العائمة الحرة ثلاث مرات في PBS لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم احتضان الأقسام في محلول بوروهيدريد الصوديوم
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية