إجراء الكيمياء المناعية على أنسجة دماغ الرئيسيات غير البشرية

0 مشاهدات3:56 د • April 28th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ابدأ بقسم دماغ الرئيسيات غير البشرية الثابت كيميائيا.

يربط البروتينات المثبتة القائمة على الألدهيد ، مما يحافظ على بنية الأنسجة ، ولكنه يترك بعض بقايا الألدهيد التفاعلية.

اغسل لإزالة طبقة الواقي من الفراغ بالتبريد المحيطة بقسم الأنسجة.

أضف عاملا مختزلا لتحييد مجموعات الألدهيد التفاعلية ، مما ينتج عنه منتجات ثانوية للتفاعل.

اغسل لإزالة هذه المنتجات الثانوية وعوامل التقليل الزائدة.

ضع محلول مانع لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحدد.

أضف الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف بروتينا معبرا عنه في مواقع محددة على الغشاء العصبي.

اغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.

أضف الأجسام المضادة الثانوية البيوتينيل التي تستهدف الأجسام المضادة الأولية.

اغسل لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.

تراكب بمجمعات أفيدين-بيوتين-بيروكسيداز التي ترتبط بالأجسام المضادة الثانوية.

يغسل مرة أخرى لإزالة المجمعات غير المرتبطة.

أدخل ركيزة كروموجينيك مع بيروكسيد الهيدروجين. في وجود بيروكسيد الهيدروجين ، يؤكسد إنزيم البيروكسيديز الركيزة ، مكونا رواسب بنية.

ابدأ بنقل أقسام بسمك 50 ميكرون من دماغ الرئيسيات غير البشري الثابت ، والتي تحتوي على منطقة الاهتمام إلى صفيحة مكونة من 12 بئرا تحتوي على PBS. اغسل الأقسام العائمة الحرة ثلاث مرات في PBS لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم احتضان الأقسام في محلول بوروهيدريد الصوديوم الطازج لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. صخور بلطف بدون غطاء.

بمجرد انقضاء 30 دقيقة ، قم بشفط بوروهيدريد الصوديوم وأضف PBS إلى كل بئر. ضع الطبق على كرسي هزاز ورجه بقوة لمدة 10 دقائق. كرر الغسيل مرتين أخريين ، أو حتى لا يتبقى أي من غاز التفاعل. قم بسد الأقسام عن طريق احتضانها في محلول من مصل عادي 2٪ و 0.5٪ جيلاتين سمك بارد ، مخفف في PBS لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة مع هزاز لطيف.

بمجرد انقضاء وقت الحضانة ، احتضن الأقسام ومحلول الأجسام المضادة الأولية مع هزاز لطيف طوال الليل في درجة حرارة الغرفة. في اليوم التالي ، بعد غسل الأقسام كما كان من قبل ، احتضان الأقسام في محلول الجسم المضاد الثانوي لمدة 1.5 ساعة في درجة حرارة الغرفة مع هزاز لطيف. بعد غسل الأقسام كما كان من قبل ، احتضن في أفيدين بيوتين بيروكسيداز ، أو محلول ABC ، لمدة ساعة واحدة مع الهزاز.

بعد ذلك ، قم بإعداد محلول جديد بنسبة 0.05٪ 3,3-diaminobenzidine مع 0.005٪ بيروكسيد الهيدروجين المخفف في TBS. بعد الغسيل ، احتضان الأقسام في محلول DAB لمدة ثلاث إلى سبع دقائق مع هزاز لطيف. بمجرد أن يتطور الراسب البني إلى اللون المطلوب ، أوقف التفاعل عن طريق الغسيل السريع مرتين في TBS البارد ، ثم من خلال سلسلة من غسلات TBS و PB الموقوتة.

09:11

تحليل المناعى في الجهاز العصبي المركزي والمحيطي الجرذ العقدة الليمفاوية أقسام الأنسجة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:30

التمهيدي لالمناعية على نسيج Cryosectioned دماغ الفئران: مثال تلطيخ لالدبقية الصغيرة والخلايا العصبية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

06:32

تقييم المؤشرات الحيوية في الدبقي التي Immunohistochemistry على الثقافات نيوروسفيري جزءا لا يتجزأ من البارافين الدبقي 3D

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:12

الخدمات المصرفية للدماغ : جعل معظم العينات بحوث الخاص

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:07

Immunostaining دفعي للكشف عن البروتين واسعة النطاق في الدماغ القرد الجامعة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:21

DiOLISTIC وصفها من الخلايا العصبية من القوارض والإنسان غير شرائح الدماغ الرئيسيات

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:23

Wholemount المناعية للكشف عن تضاريس دماغية معقدة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:55

إعداد أنسجة المخ الرئيسيات غير البشرية لمرحلة ما قبل تضمين المناعية والمجهر الإلكتروني

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:42

التصوير ثلاثي الأبعاد عالي الدقة للعدوى بفيروس داء الكلب في أنسجة الدماغ التي تم تطهيرها من المذيبات

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

06:04

استخدام الاشعه تحت الحمراء القريبة والمسح عاليه الدقة لقياس تعبير البروتين في الدماغ القوارض

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 22 أغسطس 2026