موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:59 دقيقة • April 28th, 2025
خذ شريحة تحتوي على الأقسام بالتبريد للأنسجة الإكلية للفئران الثابتة والمتنفذة.
حدد الخطوط العريضة للأقسام بقلم مسعور لخلق بيئة تلطيخ خاضعة للرسائر.
انقل الأقسام إلى غرفة الرطوبة لمنع جفاف الكواشف والأنسجة أثناء الخطوات اللاحقة.
عالج الأقسام ببروتينات المصل لمنع مواقع الارتباط غير المحددة.
اشطفه بمحلول عازل لإزالة بروتينات المصل الزائدة.
احتضان بالأجسام المضادة الأولية التي تستهدف بروتينات معينة على الخلايا الدبقية الصغيرة والخلايا العصبية.
يغسل بمحلول عازل لإزالة الأجسام المضادة الأولية غير المرتبطة.
احتضان الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالفلوروفور التي ترتبط بالأجسام المضادة الأولية.
يغسل بمحلول عازل لإزالة الأجسام المضادة الثانوية غير المرتبطة. ثم اشطفها بالماء المقطر المزدوج.
ضع وسائط تركيب مائية لحماية إشارة الفلورسنت ، ضع غطاء ، وإغلاقها.
قم بتصوير الأقسام تحت المجهر الفلوري لتصور الخلايا الدبقية الصغيرة والخلايا العصبية ذات العلامات المناعية.
جفف حواف الشرائح ، وقم بعمل حدود طاردة للسائل حول حافة الشريحة باستخدام قلم عنق الرحم ، لضمان تغطية متساوية للسائل وتقليل تأثيرات الحافة. بعد ذلك ، قم بحظر الأقسام عن طريق إضافة 300 ميكرولتر من المصل في PBS إلى كل شريحة. يجب أن يكون المصل من الأنواع التي يتم فيها رفع الجسم المضاد الثانوي. في هذه الحالة ، تم استخدام مصل الحمار.
تأكد من أن محلول
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية