موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 3:36 دقيقة • April 28th, 2025
خذ شريحة تحتوي على أقسام مدمجة بالبارافين من المجالات العصبية لأورام المخ ، وهي مجموعات من الخلايا الجذعية العصبية التي تظهر مؤشرات حيوية للبروتين النووي الخاص بالورم.
تسخينه لإذابة البارافين وإزالته باستخدام الزيلين وإعادة ترطيب الأنسجة باستخدام انخفاض تركيزات الكحول.
في مخزن مؤقت حمضي يحتوي على منظف لكشف القناع عن الحواتم على المؤشرات الحيوية واختراق الأغشية الخلوية.
شطفه، ثم عالجها بعامل مؤكسد لتعطيل إنزيمات البيروكسيديز الذاتية، ومنع الإشارات غير المحددة.
تطبيق حل حظر لإخفاء مواقع الربط غير المحددة.
احتضن بالأجسام المضادة الأولية التي تستهدف حواتم المؤشرات الحيوية.
شطفه، ثم عالجها بالأجسام المضادة الثانوية المترافقة مع البيوتين التي ترتبط بالأجسام المضادة الأولية.
اشطفها واحتضانها باستخدام أفيدين مترافق بإنزيم البيروكسيداز ، والذي يرتبط بالبيوتين.
أضف ركيزة كروموجينيك وعامل مؤكسد.
يستخدم البيروكسيديز العامل لتحويل الركيزة إلى رواسب ملونة ، مع تسمية موقع العلامة الحيوية.
قم بتصطيخ النوى ، وتجفيف الأنسجة في الكحول ، وقم بتركيب الشريحة لتصوير توزيع المؤشرات الحيوية.
أولا ، قم بإذابة البارافين عن طريق احتضان الشرائح في رف معدني عند 60 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. ثم قم بإزالة الشرائح عن طريق الحضانة في قطار الإماهة في درجة حرارة الغرفة وفقا لبروتوكول Tex. قم بتخزين الشرائح في ماء الصنبور لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة. بعد ذلك ، احتضن الشرائح في مخزن السترات المؤقت عند 125 درجة مئوية لمدة 30 ثانية عند 90 درجة مئوية لمدة 10 ثوان. اترك الشرائح لتبرد قبل شطفها خمس مرات بالماء المقطر.
بعد ذلك ، احتضان الشرائح في درجة حرارة الغرفة في بيروكسيد الهيدروجين بنسبة 0.3٪ لمدة 20 دقيقة. ثم اغسل الشرائح لمدة خمس دقائق ثلاث مرات في عازلة الغسيل مع تحريك لطيف. احتضان الشرائح طوال الليل في غرفة رطبة مضبوطة على 4 درجات مئوية مع جسم مضاد أولي مخفف. بعد ذلك ، اغسل الشرائح ثلاث مرات لمدة خمس دقائق بتحريض لطيف.
بعد ذلك ، احتضان الشرائح في جسم مضاد ثانوي مخفف بيوتينيل في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة. اغسل الشرائح ثلاث مرات لمدة خمس دقائق في عازلة الغسيل مع تحريك لطيف. بعد ذلك ، احتضن الشرائح في مركب بيروكسيداز الفجل الحار الحيوي في درجة حرارة الغرفة في الظلام لمدة ساعة. كرر الغسيل كما هو موضح سابقا. بعد ذلك ، احتضن الشرائح بشرائط ركيزة بيروكسيد الهيدروجين لمدة دقيقتين إلى خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة.
اشطف الشرائح بماء الصنبور ، واغمس الشرائح في محلول الهيماتوكسيلين لمواجهة تلطيخها. ثم اشطف الشرائح جيدا بماء الصنبور حتى يصبح الماء صافيا. جفف الشرائح وفقا لبروتوكول Tex. أخيرا ، قم بتغطية الشرائح بوسيط تثبيت قائم على الزيلين واتركها تجف على سطح مستو في درجة حرارة الغرفة.