JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 2:08 د • April 28th, 2025
ابدأ بعينة من أنسجة المخ، وهي غير شفافة بسبب وجود أصباغ ودهون. تسبب هذه المكونات تشتت الضوء في الخلايا العصبية المصنفة بالفلورسنت.
احتضان الأنسجة بالتتابع في محاليل مع زيادة تركيزات الميثانول لإزالة الماء منها وتجفيف الأنسجة تدريجيا.
ثم، عالج هذا النسيج بالميثانول المركز للتخلص من الماء المتبقي ، مما يضمن الجفاف الكامل.
بعد ذلك، انقل الأنسجة إلى مذيب مقاصة أولي يحتوي على ثنائي كلورو ميثان وميثانول.
احتضن مع الاهتزاز اللطيف للسماح للمذيب باختراق الأنسجة بعمق.
ثنائي كلورو ميثان يزيل الأصباغ والدهون من الأنسجة، مما يقلل من تشتت الضوء ويعزز الشفافية.
أخيرا، انقل الأنسجة إلى ثنائي بنزيل الأثير، وهو مذيب كاره للماء واحتضانه دون اهتزاز.
يعمل المذيب كعامل تطهير نهائي يعزز شفافية الأنسجة.
تعمل هذه العملية على تحسين اختراق الضوء، مما يتيح تصورا أكثر وضوحا للخلايا العصبية المصنفة واتصالاتها في أنسجة المخ عينة.
احتضان العينة بشكل متسلسل في 20٪ و 40٪ و 60٪ و 80٪ و 100٪ من الميثانول لمدة ساعة واحدة لكل منها في درجة حرارة الغرفة. ثم احتضنه في الميثانول الطازج بنسبة 100٪ طوال الليل. في اليوم التالي ، احتضان العينة في 66٪ DCM طازج في 33٪ ميثانول لمدة ثلاث ساعات في درجة حرارة الغرفة مع الرج. بعد ثلاث ساعات ، احتضان العينة في ديبنزيل الأثير دون اهتزاز حتى تصبح صافية. ثم قم بتخزينه في ديبنزيل الأثير حتى التصوير.