الكشف عن العصبية علم الطوبوغرافيا في حلبة لون موضوع

ونحن نقدم دليلا عمليا لتقديم استشفاف

يصف هذا الإجراء بروتوكولا متعدد الاستخدامات للتتبع في الجسم الحي يستغل جلوتينين جرثومة القمح المقترن بفلوروفورات Alexa لتتبع الدوائر العصبية. أولا ، يتم إجراء شق في المنطقة الصدرية السفلية والمنطقة القطنية العلوية ، ويتم قطع اللفافة وعضلات العمود الفقري السطحية. الخطوة الثانية هي إجراء استئصال الصفيحة الفقرية الظهرية.

بعد ذلك ، يتم إعداد القطب الصغير وتوصيله بمناور الصغير. يتبع ذلك حقن الضغط للآثار العصبية في الحبل الشوكي. تتمثل الخطوة الأخيرة من هذا الإجراء في توفير الرعاية المناسبة بعد الجراحة أثناء التعافي وإعطاء متسع من الوقت لنقل المتتبعات عبر المسالك المستهدفة.

في النهاية ، يمكن الحصول على نتائج توضح تنظيم واتصال الخرائط الطبوغرافية في قشرة المخيخ وجذع الدماغ والحبل الشوكي من خلال الفحص المجهري المناعي الفلوري. الميزة الرئيسية لهذا التتبع على أجهزة التتبع الموجودة مثل BDA أو W-G-A-H-R-P ، هي أن متتبعات WGA Alexa ساطعة بما يكفي لجميع صور التثبيت مباشرة بعد التتبع. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال علم الأعصاب للأنظمة ، مثل ما هو المنطق الذي يؤكد على النمذجة العالمية للإسقاطات الطبوغرافية المتعددة داخل وبين الأنظمة القشرية والمخيخية وجذع الدماغ والعمود الفقري قبل بدء الإجراء.

تأكد من أن جميع عمليات التلاعب متوافقة مع إرشادات IACUC ، وأن مجالا معقما متاحا للجراحة ، وأن جميع الأدوات التي سيتم استخدامها قد تم تعقيمها. يجب استخدام التقنيات الجراحية المعقمة طوال فترة الجراحة بعد إعطاء مخدر معتمد للحيوان ، والتأكد من تحقيق مستوى تخدير مناسب عن طريق إجراء قرصة إصبع القدم. يجب أن يكون منعكس الدواسة غائبا بمجرد تخدير تماما.

احلق الفراء فوق المنطقة المراد تشغيلها باستخدام ماكينة قص الشعر. بعد ذلك ، ضع الجانب الظهري للحيوان لأعلى على وسادة شاش معقمة باستخدام نمط دائري من الداخل إلى الخارج. امسح المنطقة المحلوقة بمجموعتين من مناديل الكحول ، ثم 70٪ كحول بيتادين.

ثم مرة أخرى باستخدام مناديل الكحول ، ثم حدد المجال الجراحي بوضوح عن طريق وضع وسادة شاش معقمة مع ثقب صغير مقطوع فيها فوق بعد تحضير بشكل صحيح. بهذه الطريقة ، انتقل إلى الجراحة وحافظ على تقنية جراحية معقمة مناسبة. ارفع الجلد باستخدام الملقط وقم بعمل شق بالمقص عند خط الوسط فوق منطقة أسفل الظهر السفلية مباشرة.

قطع اللفافة وعضلات العمود الفقري السطحية إذا لزم الأمر ، ووقف أي نزيف عن طريق كي الأوعية الدموية. ثم حدد نقطة المنتصف بين العملية المفصلية وعملية العمود الفقري الظهري ، وقم بقص الصفيحة هنا على جانبي العمود الفقري. بعد ذلك ، قم بإجراء استئصال الصفيحة الفقرية الظهرية عن طريق إزالة العمليات الشائكة لجزء أو جزأين من الحبل الشوكي القطني العلوي السفلي للصدر.

باستخدام حقنة ميكرومتر، املأ ماصة زجاجية مجمعة بأداة التتبع. ثم شد القطب الزجاجي الصغير في مكانه على مناور صغير. بعد ذلك ، املأ الإبرة بالكواشف.

أدخل الماصة المجمعة من 0.1 إلى 0.5 ملم في المنطقة القطنية العلوية السفلية من الصدر من الحبل النخاعي. في منتصف الطريق بين خط الوسط والحافة الجانبية لضغط الحبل الشوكي ، قم بحقن ما يقرب من 0.5 ميكرولتر من محلول 2٪ من رص القمح LOR ، وجوهرة القمح المترافق ، أو تراص بيروكسيداز الفجل الحصان ، أو أمين ديكستران البيوتينيل بنسبة 10٪ في PBS مكمل بنسبة 0.5٪ أخضر سريع على مدى ثلاث إلى خمس دقائق. إذا لم يتم إخراج جهاز التتبع بسهولة من الماصة ، فقم بسحب الطرف ببطء لإنشاء جيب صغير في الأنسجة.

ثم حاول الحقن مرة أخرى بعد الانتهاء من الحقن المجهري. أغلق الجلد برفق باستخدام مشابك الجرح وغراء الأنسجة. ثم ضع في غرفة الاسترداد على وسادة تدفئة.

راقب معدل التنفس وتحقق من العلامات التي تدل على أن يحاول الحركة. بعد أن يتعافى من التخدير ، أعده إلى قفص المنزل وقم بتوفير الماء والغذاء المخصص والمسكنات حسب الحاجة. تحقق بشكل روتيني من علامات الألم أو الانزعاج أو العدوى ، وتناول الطعام والشرب الكافي للحيوانات التي يتم حقنها بجلوتين جنين القمح والمقتبات المترافقة.

بعد 24 ساعة من الحقن المجهري. يتطلب BDA عادة أوقات بقاء أطول لتتبع الإسقاطات العصبية بالكامل ، وبالتالي رسم الخرائط الكاملة لإسقاطات المخيخ الشوكي. يتم التضحية بهذه بعد حوالي 11 يوما.

تم حقن متتبعات Glutin Alexa في الحبل الشوكي القطني العلوي السفلي الصدري. يوضح هذا التخطيطي أصل وإنهاء غلوتينين جرثومة القمح. Alexa 5 55 تسمى الخلايا العصبية المخيخية الشوكية.

يوضح هذا الشكل موقع الحقن بعد توصيل جنين القمح الرصي Alexa 5 55 إلى المنطقة السفلية الصدرية العلوية من النخاع الشوكي البالغ. تظهر صورة التثبيت بأكملها هذه اللول الأمامي بعد حقن القمح. جيما جلوتينين.

Alexa 5 55 في المنطقة القطنية العلوية الصدرية السفلية من النخاع الشوكي. يشار إلى Loles بالأرقام الرومانية. هنا نرى أن غلوتينين أليكسا 5 55 التتبع المسبق للجهاز المخيخي الدوراني يكشف عن نطاقات محددة من الألياف الطحلبية كما هو موضح في قسم الأنسجة الإكليلية هذا.

يلخص هذا التخطيطي لمخيخ الفأر النمط العام للمخيخ الشوكي. عصابات ألياف الطحلبالقجروتين القمح في Alexa. تم حقن 5 55 في الجانب الأيمن من الحبل الشوكي القطني وغلوتين القمح في Alexa ، 4 88 في نفس الجزء على الجانب الأيسر ، كما هو موضح في قسم الأنسجة الإكليلية المقطوع من خلال LOEs الخلفية.

تم نقل كل من متتبعات التراص Weger Alexa إلى المخيخ ونجحت في تصنيف مجموعات فرعية مميزة من أطراف الألياف الطحلبية ، بشكل رئيسي في طبقة الخلايا الحبيبية ، والتي تسمى GCL Weger Agglutinin Alexa يمكن استخدامها مع الكيمياء المناعية والأنسجة لوضع العلامات الثلاثية للخلايا العصبية والإسقاطات. هنا ، يتم ترسيب Weger Agglutinin Alexa 5 55 في أطراف الألياف الطحلبية في ثلاثة شفتين. توضح هذه الصورة عالية الطاقة للمنطقة المعبأة وضع العلامات الواضحة على أطراف الألياف الطحلبية.

تكشف هذه الصورة لتلوين زين اثنين عن مجموعة من خطوط خلايا البكيني في Lole three. توضح هذه الصورة عالية الطاقة للمنطقة المعبأة وضع العلامات الواضحة لخلايا البكيني في طبقة خلية البكيني والطبقة الجزيئية. هنا يكشف تلطيخ DPI عن النوى العصبية والدبقية.

توضح هذه الصورة ذات الطاقة العالية للمنطقة المعبأة وضع العلامات المكثفة لطبقة الخلايا الحبيبية الغنية بالنوى وطبقة خلية البكيني ، ووضع العلامات الأقل كثافة في الطبقة الجزيئية. ظهرت هنا ، تظهر الصورة ملصقات ثلاثية بواسطة Wheatgerm Agglutinin و Alexa 5 55 serin two و DPI للنطاقات الواردة ، وخطوط خلايا البكيني ، وبنية cyto العامة. أخيرا ، توضح هذه الصورة ذات القوة العالية للمنطقة المحاصرة بوضوح قوة هذه التقنية للكشف عن بنية cyto لهياكل الدماغ.

بمجرد إتقانها ، يمكن تنفيذ هذه التقنية في 20 دقيقة لكل إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر تصوير الأنسجة مباشرة بعد القطع. على الرغم من أن التصوير في غضون يومين من القطع لا يزال يسمح بتصوير الألياف والمحطات المصنفة بنجاح باتباع هذا الإجراء.

يمكن إجراء طرق أخرى مثل تتبع النسب الجيني من أجل الإجابة على أسئلة إضافية مثل ، ما هي أنماط الإسقاط وأنماط الإنهاء لمجموعات الخلايا المحددة وراثيا؟