تحليل للهجرة كريست العصبية والتمايز بواسطة الصليب الأنواع زرع

الهدف العام من هذا الإجراء هو تطعيم أنبوب عصبي ظهري من جنين السمان إلى جنين دجاج متطابق على مراحل ، وذلك لتتبع هجرة ومصير خلايا القمة العصبية. يتم تحقيق ذلك عن طريق تمزيق ثقب صغير أولا في غشاء IGN لجنين الدجاج المضيف للوصول إلى الأنبوب العصبي. ثم تتم إزالة جنين السمان المتبرع من بيضته لتحضيره لاستئصال الكسب غير المشروع.

في الخطوة التالية ، يتم استئصال منطقة الاهتمام من الأنبوب العصبي للجنين المضيف. ثم يتم استئصال منطقة مماثلة من الأنبوب العصبي للمتبرع للتطعيم. بعد ذلك ، يتم زرع الأنبوب العصبي المتبرع في الأنبوب العصبي المضيف.

أخيرا ، يتم تحضين الجنين الخيمري إلى المرحلة المرغوبة للكشف عن الخلايا العصبية التي وصلت إلى العضو المفضل. في النهاية ، يمكن تصور هجرة وتمايز خلايا القمة العصبية المشتقة من المتبرع إلى مواقع مختلفة في الجنين المضيف من خلال الفحص المجهري المناعي الفلوري. يعد العرض المرئي لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية لأن خطوات التشريح والتطعيم الدقيقة تتطلب مهارات حركية دقيقة جدا ، مما يجعل من الصعب تعلمها.

ابدأ بغسل أي بقايا من بيض الكتاكيت بالماء الفاتر. رتبي البيض أفقيا على صينية ثم ضعي علامة على الجوانب المتجهة لأعلى بقلم رصاص للإشارة إلى المنطقة التي سيتم توطين الجنين فيها. لتحضير X ovo للأجنة المانحة ، احتضان الجانب الحاد لأرجل السمان.

بعد ذلك ، ضع البيض في حاضنة رطبة بدرجة حرارة 38 درجة مئوية وقم بتشغيل وظيفة الهزاز. بعد انتهاء البيض ، قم بتحضين العمم عن طريق رشها بنسبة 70٪ من الإيثانول ثم مسحها بسرعة بمناديل كيم لتجنب أي امتصاص من خلال البيضة ، ضع القشرة كل بيضة معقمة على حامل بيض فردي ، على غرار طبق بتري المبطن بمناديل كيم المطوية المبللة الموضحة هنا. ثم باستخدام ملقط AA المعقم ، اضغط على ثقب صغير في السطح العلوي لقشرة البيضة في الطرف المدبب من البيضة.

جهز حقنة خمسة ملليلتر بإبرة تحت الجلد قياس 18 ونصف. ثم مع مواجهة الشطبة للطرف المدبب للبيضة ، أدخل الإبرة عموديا في الفتحة الموجودة في قشرة البيضة. لتجنب إتلاف صفار البيض عن طريق الخطأ عن طريق الشفط ، قم بتنظيف الفتحة بنسبة 70٪ من الإيثانول كما كان من قبل وأغلق الفتحة بشريط لاصق.

ثم باستخدام ملقط A المزدوج ، اضغط على ثقب آخر في السطح العلوي المحدد للساق الأفقية ، وليس تماما في القمة. بعد ذلك ، أدخل جانبا واحدا من ملقط القزحية المنحنية في الفتحة الموازية للبويضة. ثم تقرص القشرة على القشرة وتعمل بحركة دائرية.

كسر نافذة ، قطرها سنتيمترين في بيضة الدجاج ، وتخلص من قشرة البيضة التي تمت إزالتها. يجب أن يظهر الجنين على شكل قرص معتم أعلى صفار البيض. تخلص من أي بويضات غير مخصبة تم تحديدها بواسطة بقعة بيضاء صغيرة على سطح صفار البيض أو عدم وجود جلد الناسف.

الآن أثناء ارتداء الحماية المناسبة للعين ، قم بثني إبرة تحت الجلد بقياس 26 ونصف بزاوية 45 درجة بدءا من قاعدة الإبرة. بعد إرفاق الجانب المائل بالإبرة المثنية حتى حقنة ملليلتر واحد ، املأ الإبرة بحبر الهندي المخفف. ثقب غشاء الصفار خارج محيط الناسف، وحرك طرف الإبرة أسفل الجنين، بالقرب من سطح الصفار، ولكن ليس في الطبقات الجنينية.

ثم حقن ما يكفي من الحبر لتحديد الخطوط العريضة للجنين وتجنب حقن أي فقاعات. اسحب الإبرة بعناية. الآن باستخدام مجهر استريو ومصدر ضوء بحمل حراري محدود ، مثل مصباح الألياف البصرية المنحنية الموضح هنا.

تنظيم الأجنة وفقا للهامبرغر وهاميلتون. سجل المسرح على قشر البيض. ثم ضع قطرتين إلى ثلاث قطرات من محلول الرنين المعقم الدافئ على سطح الأجنة لمنع الجفاف والتلوث.

ثم قم بتمديد الفيلم على سطح البيض لإغلاق النوافذ مؤقتا. بعد ذلك ، قم بإعداد بيض السمان للزراعة. قبل إخراج البيض من الحاضنة ، املأ طبق بتري بمحلول الرنين.

ثم افتح البيض على الجانب الحاد باستخدام ملقط منحني للكشف عن الجنين. باستخدام مقص التشريح ، قم بعمل أربع جروح على شكل مربع من خلال غشاء فيلي وجلد الناسف خارج الجنين ، مع التأكد من أن جميع الجروح تلتقي. ثم باستخدام ملقط القزحية المنحنية ، أمسك بلطف حافة واحدة مقطوعة وارفع الجنين من البويضة وانقله إلى طبق بتري المجهز.

أخيرا ، قم بإزالة غشاء vitelline برفق باستخدام ملقط رقم خمسة ، ثم قم بوضع الأجنة تحت مجهر تشريح. قم بإزالة الفيلم من جنين الفرخ المضيف. ثم باستخدام إبرة التنغستن الحادة ، قم بتمزيق ثقب صغير في الغشاء السابع في المنطقة المرغوبة من الأنبوب العصبي.

أضف قطرة من محلول الرنين إلى الجنين. بعد ذلك ، بالنسبة للطعوم أحادية الجانب ، مثل تلك التي يتم إجراؤها في هذا الفيديو ، استخدم إبرة زجاجية مصبوبة لعمل شقوق منقارية وسرية عرضية بعناية إلى منطقة الدماغ المتوسط للأنبوب العصبي ، ولا تمتد إلى ما وراء التجويف. ثم قطع ثنائيا بين الأنبوب العصبي الظهري والأديم المتوسط الجانبي.

أخيرا ، افصل بعناية الخطة السابقة المستأصلة عن الأنبوب العصبي ، ثم قم بإزالتها من الجنين عن طريق شفطه في ماصة زجاجية دقيقة. أولا ، استخدم جنين السمان المتطابق مع المرحلة. ثم استئصال منطقة مماثلة الحجم من الأنبوب العصبي كما هو موضح للتو وشفط المتبرع X في ماصة زجاجية دقيقة تحتوي على محلول رنين.

انقل X explan المجاورة للمنطقة المستقرة من مضيف الكتكوت. ثم باستخدام إبرة زجاجية مسحوبة ، قم بتوجيه explan ex لتوجيهه برفق إلى المنطقة المغسولة. أضف بعناية بضع قطرات من محلول الجرس إلى الجنين لمنع الجفاف.

أخيرا ، أغلق النافذة بشريط تعبئة ، وتأكد من أن الشريط يغلق المنطقة بأكملها من البيضة ذات النوافذ ، وأعد البيضة إلى الحاضنة حتى المرحلة المرغوبة ، وقم بإيقاف تشغيل وظيفة التأرجح أثناء احتضان kyira ، ويمكن قلب X برفق يدويا مرتين في اليوم لزيادة قابليتها للحياة. إذا تم استهداف مراحل لاحقة من التطور ، فإن هذه الصورة التمثيلية للمنطقة المطعمة للأنبوب العصبي بعد ست ساعات من إعادة الحضانة إلى HH 11 ، تظهر الدمج المتوقع للأنسجة المانحة للسمان المطعمة في الأنبوب العصبي للكتكوت المضيف. يظهر هذا المقطع العرضي عبر المنطقة المطعمة في HH 11 خلايا قمة عصبية مصنفة ب hnk ، واحدة تهاجر بشكل جانبي بعيدا عن الأنبوب العصبي.

خلايا السمان التي تساهم في تيار هجرة خلايا القمة العصبية ، والأنبوب العصبي يتم تصنيفها بوضوح باستخدام QCPN. في مراحل لاحقة ، يمكن تتبع الخلايا المشتقة من خلايا القمة العصبية السمان إلى الأنسجة المستهدفة النهائية. كما يتضح من هذا الشكل ، تتخللها الخلايا المسمى QCPN داخل جنين الكتكوت مين تشي من عملية الفك العلوي في E خمسة ، يمكن بسهولة دمج الجسم المضاد QCPN مع الأجسام المضادة الأخرى لفحص تمايز خلايا القمة العصبية المشتقة من السمان.

في البيئة المضيفة. كما هو موضح هنا ، يتم تصنيف الخلايا العصبية العصبية المشتقة من خلايا القمة العصبية ثلاثية التوائم بواسطة QCPN و T UJ أجسام مضادة واحدة. باتباع هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل الكيمياء المناعية والتهجين في الموقع من أجل الإجابة على أسئلة إضافية مثل الأنسجة التي تسببها خلايا القمة العصبية ، وما هي الجينات التي تعبر عنها خلايا القمة العصبية أثناء تمايزها إلى أنسجة مختلفة.