السريرية اختبار وإزالة العمود الفقري الحبل في الفأر نموذج لتصلب الأنسجة العضلية الجانبية (ALS)

مرحبًا، اسمي لار تيرنر. أنا باحثة ما بعد الدكتوراه في قسم أمراض الأعصاب بجامعة إنغهام، ألمانيا. مرحبًا، اسمي لين غوندا.

أنا طالب في كلية الطب وأقوم بإعداد رسالة التخرج الخاصة بي في هذا المختبر. سنعرض لكم اليوم الاختبار السريري لـ SODG 93، وهو نموذج موس (Moss) للتصلب الجانبي الضموري. علاوة على ذلك، سنقوم بتوضيح اختبار الوظيفة الحركية باستخدام ما يسمى باختبار الروتار (rotor test)، بالإضافة إلى اختبار آخر للوظيفة الحركية وهو اختبار التشبث بالسلك المعلق (hanging Wire grip) من أجل إجراء تحليل مناعي.

بعد الاختبار الوظيفي لفئران a s، تتكون الإجراءات الضرورية من إزالة الحبل الشوكي، وعصب STIC، وعضلة gastroc. نريد عرض هذه الإجراءات الجراحية بالتفصيل، وسنعرض بعض النتائج المناعية النموذجية في النهاية. حسناً، لنبدأ الآن بالاختبارات السريرية.

هذا فأر من النوع البري (wild type) يتحرك بحرية ولا يظهر عليه أي أعراض سريرية مثل رعشة العضلات أو الشلل وفقاً لنظام التصنيف السريري لدينا، وهو ما يعادل الدرجة الرابعة. أما هذا فهو فأر مُعدل جينياً مصاب بمرض ALS.

في مرحلة مبكرة من المرض، يظهر الحيوان رعشة شديدة في الطرف الخلفي الأيمن تصنفه ضمن الدرجة SCORE three E. وتصنف التشوهات الشديدة في المشية هذا الحيوان ضمن الدرجة two. أما سحب طرف خلفي واحد على الأقل فيُصنف كدرجة سريرية one. وفي اختبار السلك المعلق، يتم تقييم القوة العضلية الخام. يوضع كل فأر على سلك مصنع خصيصاً ويتم قلبه بحذر رأساً على عقب فوق قاعدة مغطاة بالقش.

بعد التدريب لثلاث مرات متتالية لمدة 180 ثانية على الأقل، يتم قياس زمن الكمون قبل السقوط. تُمنح كل فأرة ما يصل إلى ثلاث محاولات للتمسك بالغطاء المقلوب لمدة أقصاها 180 ثانية، ويتم تسجيل أطول فترة زمنية مقارنة بالفأرة من نوع السلك الأبيض على الجانب الأيمن. أما الفأرة المعدلة وراثياً بـ plaque على الجانب الأيسر فهي ضعيفة جداً وتسقط من على الغطاء قبل الوصول إلى الحد الأقصى.

يُستخدم جهاز قضيب الدوران (Rotor rod) لقياس التنسيق الحركي والتوازن والقدرة على التعلم الحركي. ويتطلب الأداء الجيد درجة عالية من التنسيق الحسي الحركي. يتكون الجهاز من محور دوار يعمل بمحرك ويتم التحكم فيه بواسطة الكمبيوتر، وخمس مسارات لخمسة فئران.

يتم الكشف عن تعثر الفئران تلقائيًا من خلال الضغط على اللوحة البلاستيكية السفلية. بعد التدريب لثلاث مرات متتالية لمدة لا تقل عن 180 ثانية وبسرعة ثابتة تبلغ 15 دورة في الدقيقة، يتم قياس الوقت الذي يمكن أن يظل فيه الحيوان على الروتاتور الدوار. يخضع كل حيوان لثلاث محاولات ويتم تسجيل أطول فترة زمنية قبل السقوط.

تجري الفأرة من النوع البري السليم على الجانب الأيسر دون صعوبة على قضيب الدوران. وفي المقابل، تعاني الفأرة المعدلة وراثياً a s mo على الجانب الأيمن من مشكلات شديدة حتى في البقاء على قضيب الدوران، وتنزلق بعد فترة كما يُلاحظ من الخلف. يمكنك رؤية صعوبات الجري الشديدة للفأرة retre الموجودة على اليسار.

وبالمقارنة مع فأر wire tap السليم، فإنه لا يستطيع مواكبة سرعة القضيب الدوار ولا يمكنه الدفع للأعلى باستخدام أطراف HIN. ومن أجل إجراء تحليل كيميائي مناعي للنخاع الشوكي، يجب تضحية الحيوانات. ومن المهم جداً اتباع الإرشادات المحلية بدقة دائماً لضمان السلوك السليم في تجارب الحيوانات.

في هذا السياق، وفي هذا العرض الموجز والمبسط للعمود الفقري والأنسجة المحيطة به، يتم توضيح البنى التشريحية الرئيسية. سنقوم بوضع الحيوان على جانبه البطني والبدء في تجهيز العضلات من الكيس الظهري. وبعد إزالة النسيج العضلي، سنصل إلى العمود الفقري الذي يحيط بالنخاع الشوكي.

بعد تضحية الحيوان وترويحه بمحلول يحتوي على البارافورمالدهيد، يمكن إزالة النخاع الشوكي. يُوضع الحيوان على طاولة عمليات وتُثبت أطرافه بالكامل على الجوانب من أجل كشف الجزء الخلفي من الفأر. يتم ترطيب الحيوان لتسطيح غطاء الشعر وتسهيل إجراء الشق الجلدي التالي.

لهذا الغرض، يُستخدم مشرط حاد. يجب الحرص على شد الجلد نحو الجانبين. ولتسهيل عملية القطع، يتم تحضير عضلة الساق.

يجب أيضاً إجراء شق في جلدهم. وبعد اكتمال شق الجلد، يتم سحبه بلطف إلى الجانب. وباستخدام ملقط، نقوم بإزالة عضلات الساق والعصب الوركي، ثم نواصل الوصول إلى الحبل الشوكي ونضع الحيوان على طاولة عمليات جديدة.

الآن أصبح من السهل تحديد الجمجمة والرقبة والعضلات والعمود الفقري. وبعد تحديد كل هذه التراكيب، يمكن الانتقال بسهولة إلى الخطوة التالية، حيث يجب إزالة عضلات الرقبة والرابط النخاعي.

يجب توخي الحذر لتجنب إجراء شق عميق للغاية قد يؤدي إلى إصابة العمود الفقري. في الخطوة التالية، تُزال العضلات المجاورة للفقرات بالكامل للكشف عن العمود الفقري. ومن أجل الوصول إلى العمود الفقري، يجب إجراء عدة عمليات استئصال.

نبدأ من الجزء العنقي من العمود الفقري، بما في ذلك المفصل الأطلسي القذالي. ولإجراء عملية استئصال الصفيحة الفقرية، يجب علينا قطع القوس الفقري لنتمكن من إزالة جميع النتوءات الفقرية من جسم الفقرة. وكما تم توضيحه سابقاً، تبدأ عملية استئصال الصفيحة الفقرية بقطع الأقواس الفقرية.

بعد ذلك، يمكن سحب الصفاق بعيداً. ومرة أخرى، يجب توخي الحذر لعدم إصابة الحبل الشوكي لأن هناك المزيد من الأقواس التي يجب إزالتها. ومن المفيد جداً استخدام مقصات مائلة لعمل شقوق في عدة أقواس فقارية من كلا الجانبين في آن واحد.

بعد ذلك، اسحب النتوءات الظهرية لإزالة الصفائح الفقرية تماماً. كما يظهر في اللقطة القريبة، يجب إدخال المقص بعناية في أقصى الجانب الوحشي من القناة الشوكية. يجب إزالة الأجزاء الوحشية المتبقية من العمود الفقري لتسهيل الإزالة الكاملة للنخاع الشوكي لاحقاً.

تعد ما تسمى بالتوسعات العنقية والقطنية من المعالم التشريحية للنخاع الشوكي. بعد الانتهاء من عمليات الاستئصال للنخاع الشوكي بأكمله، تأكد من قطع جميع الجذور البطنية للنخاع الشوكي وتحريره من الأم الجافية للسحايا. بعد ذلك، يتم قطع النخاع الشوكي العنقي.

يتم البدء في الإزالة مرة أخرى من الجهة القحفية. يجب لمس النخاع الشوكي بحذر شديد لتجنب إلحاق الضرر بهذا النسيج، لأن ذلك قد يؤدي إلى قيود شديدة في التحليل المناعي الكيميائي لاحقاً. ويستمر استئصال النخاع الشوكي وصولاً إلى المستوى الصدري ثم المتابعة حتى الجزء القطني.

يتم قصها أخيراً مرة أخرى هذه المرة عند جانب الذيل الحصاني. والآن أصبح بإمكاننا تحريرها بالكامل. هنا ترون الحبل الشوكي موضوعاً بجوار موقعه الأصلي تماماً في عمود RAL.

في النهاية، يتم وضعه في محلول تثبيت لاحق من Paraform Hyde. وكمثال كلاسيكي للتحليل الكيميائي النسيجي المناعي للنخاع الشوكي، يمكنك استخدام جسم مضاد يتعرف على choline, acetyl transferase لتحديد العصبونات الحركية في القرن الأمامي للنخاع الشوكي. تظهر هنا مجموعة كبيرة من العصبونات الحركية في حيوان من النوع البري السليم.

في المقابل، يُظهر الحيوان المعدل وراثياً المصاب بـ LS في المرحلة النهائية عدداً أقل بكثير من العصبونات الحركية في القرن الأمامي. بمشاهدة هذا المقال المرئي، يجب أن تكون قد تعلمت الفحص السريري الأساسي لنموذج الفأر SODG 93 المصاب بالتصلب الجانبي الضموري.

تم استعراض اختبارين للسلوك الحركي وهما اختبار الدوار (rotor test) واختبار السلك المعلق (hanging wire test). ويوفر هذان الاختباران إمكانية جيدة لتقييم الوظيفة الحركية الأساسية، كما أنهما سهلان في التنفيذ، وحسّاسان في الكشف عن القصور الحركي، وفعالان من حيث الوقت.

يتكون الجزء الرئيسي من هذا الفيديو من عرض لتقنية تحضير الحبل الشوكي. ويمكن تطبيق هذه التقنية بالطبع على أي نموذج مرض آخر في الفئران، وهي خطوة أساسية للتحليل الكيميائي المناعي اللاحق لباثولوجيا المرض في الحبل الشوكي. شكراً لكم على المشاهدة.

نأمل أن يكون مقال الفيديو هذا مفيداً لتجاربكم المستقبلية.