Name: السريرية اختبار وإزالة العمود الفقري الحبل في الفأر نموذج لتصلب الأنسجة العضلية الجانبية (ALS) (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 35 s
Description: تعلم تقييم الوظائف الحركية في نموذج الفأر SOD1-G93A لدراسة التصلب الجانبي الضموري. يوضح الفيديو اختبارات السلك المعلق ودوار التوازن واستئصال الحبل الشوكي للتحليل المناعي النسيجي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وقد تلقت منحة LT الدعم من Forschungsförderungsprogramm من الطب جامعة غوتنغن. وقدم الدعم وPL ميغابايت من قبل مركز بحوث DFG للعلم وظائف الأعضاء الجزيئية من الدماغ (CMPB)، غوتنغن. الكتاب أشكر الدكتور لارس Tatenhorst للحصول على المساعدة مع بالفيديو وLiebau بيرجيت للمساعدة في الصوت وتحرير الفيديو.

وقد تم شراء الحيوانات من مختبر جاكسون (# 002726) 1. وسجل سريريا أنهم وتعرض لاختبار وظيفة الحركة (rotarod الاختبار) وقوة العضلات (شنقا اختبار الأسلاك). وقد تم تنفيذ جميع هذه الاختبارات، وقتل في وقت لاحق من هذه الحيوانات من اجل اعداد الحبل الشوكي وفقا قريبة جدا من المبادئ التوجيهية المحلية لحسن السلوك من التجارب على الحيوانات. 1. السريرية نقاط ويتم فحص وبصرف النظر عن تقييم للفئران من وزن الجسم لعلامات العجز الحركي بما يلي 4 نقاط سجل النظام 2: 4 نقاط: عادي (أي علامة على ضعف المحرك) 3 نقاط: الهزات أطرافه الخلفية واضحة للعيان عندما علقت من ذيله 2 نقاط: شذوذ مشية موجودة (1) نقطة: سحب واحد على الأقل أطرافهم هند 0 نقطة: متناظرة<html> والشلل، وعدم القدرة على الحق نفسه أو فقدان 20٪ من وزن الجسم أقصى، وفي هذه الحالة يصرح باستخدامها فورا الحيوانات ويتم إنهاء التجربة 2. اختبارات وظيفة الحركة وقوة العضلات سلك معلق ويستخدم هذا الاختبار لتقييم قوة العضلات 3 و 4. جميع الحيوانات إجراء هذا الاختبار واحد على الأقل أو بعد يومين من اختبار rotarod. تغطية 60 سم فوق القش وضعت كل الماوس على غطاء السلك حسب المقاس مع فترات من 0.8 سم، واتجهوا بحذر رأسا على عقب، أسفل. بعد تدريب لثلاث مرات متتالية ما لا يقل عن 180 ق يقاس الكمون في الانخفاض. وتعطى كل فأر تصل إلى ثلاث محاولات الابقاء على الغطاء المقلوب لمدة أقصاها 180 ق، وتسجل أطول فترة. Rotarod إختبار ق استخدمت = &quot;jove_content&quot;&gt; وجهاز rotarod (أوغو باسيلي، Comerio، ايطاليا) لقياس التناسق الحركي والتوازن والقدرة على التعلم الحركي 3 و 4. أداء جيد يتطلب درجة عالية من التنسيق الحسية. يجب وضع الجهاز في بيئة هادئة وغير مزعجة، لتجنب المنبهات تتناقض لاختبارها على الحيوانات. وهو يتألف من مغزل بالمحركات الكمبيوتر التي تسيطر عليها بالتناوب والممرات خمسة لمدة خمس الفئران. تم الكشف عن السقوط من الفئران تلقائيا بواسطة الضغط على طبق من البلاستيك في الجزء السفلي. بعد يقاس تدريب لثلاث مرات متتالية ما لا يقل عن 180 ق بسرعة ثابتة من 15 دورة في الدقيقة في الوقت الذي حيوان يمكن أن تبقى على قضيب الدورية. كل حيوان يخضع لثلاث محاكمات، وأطول من دون كمون يتم تسجيل هبوط. يتم اختيار وقت من 180 ق كما قطع الوقت لأن يتم الكشف عن الغالبية العظمى من اختلافات كبيرة في التنسيق الحركي في هذا الإطار الزمني. 3. الحبل الشوكي التحضير <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقتل الحيوانات عن طريق نفخ CO 2 وفقا للمبادئ التوجيهية المحلية وperfused فورا transcardially مع حل PBS يعقبه حل بارافورمالدهيد 4٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من أجل إعداد الحبل الشوكي من الفأرة التضحية، يتم وضع الحيوان على جدول تشغيل ويتم إصلاح الأطراف الأربعة على الجانب من أجل فضح الجانب الخلفي من الماوس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وغسل قصير مع حل الإيثانول 70٪ ينظف موقع من تشريح ويسطح معطف الشعر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم شق الجلد مع مشرط حاد في خط الوسط. من أجل تسهيل قطع يتمدد الجلد لكلا الجانبين. إذا يجب أن تكون مستعدة عضلات الساق، كما أن بشرتهم قطعي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الانتهاء من شق الجلد، ويتم سحبها جانبا مع زوج من ملاقط لفضح اللفافة الكامنة السطحية من الجسم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عضلات الرقبة والرباط القفوي يجب ازالتها وهي كاليفورنياأعد refully. يجب الحرص على عدم شق إلى الحبل الشوكي بعمق وآفة. ويمكن أيضا للعضلات الكتف يمكن إزالتها من أجل فضح أفضل العمود الفقري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم تتم إزالة عضلات مجاورة للفقرة من العمود الفقري بأكمله. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من أجل فتح laminectomies العمود الفقري عدة لا بد من القيام بها. ينبغي للمرء أن يبدأ من الجزء العلوي في الجمجمة في موقع مشترك الفهقي القذالي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من الأسهل لإزالة التثبيت في الأطراف العلوية 2 وتجهد الرقبة لتكون أكثر قدرة على أداء استئصال الصفيحة الفقرية للفقرات الأولى. يتم سحب هذه بعيدا دون لمس تعرض الحبل الشوكي عنق الرحم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تتم إزالة أكثر من فقرات بواسطة transecting 1 الأقواس الفقري في كلا الجانبين مع مقص الزاوية ومن ثم سحب على العمليات ظهري. يجب إزالة أجزاء الجانبي المتبقية من فقرات لتسهيل الإزالة الكاملة في وقت لاحق من الحبل الشوكي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معلما التشريحية للالفقري القطنيالحبل ل هو intumescence أن هذا هو ايضا في النخاع الشوكي عنق الرحم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد ان انتهى لاستئصال الصفيحه من الحبل الشوكي بأكمله، تأكد من أن القطع أيضا عن جذور بطني والافراج عن الحبل الشوكي من الأم الجافية للسحايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يتم قطع الحبل الشوكي العنقي cranially والبدء في إزالة الحبل الشوكي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أخيرا تم أيضا قطع الحبل الشوكي في ذيل الفرس، البعيدة تماما أن يكون صدر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في النهاية، يتم وضع الحبل الشوكي الى حل (لامتصاص العرق مثلا 4٪) بين عشية وضحاها postfixating ويمكن معالجة أخرى. نحن cryosection عادة الحبل الشوكي كي يكون جاهزا لتحليل immunohistological. </li></ol> 4. ممثل النتائج أسلوب إعداد الحبل الشوكي يمثل محور هذه المقالة الفيديو. وهو شرط أساسي لباجتزاء الأنسجة في وقت لاحق، وفي نهاية المطاف لتحليل immunohistological من الحبل الشوكيالمقاطع ل الحبل. كمثال على نتيجة نهائية، وهي workup المناعى للمنطقة القرن الأمامي للنخاع الشوكي القطني الماوس لwildtype (بالوزن)، وعلى الهيئة العامة للسدود G93A التحوير (TG) ويظهر الماوس. يمكن التعرف على الخلايا العصبية الحركية مع الأجسام المضادة لمكافحة دردش الابتدائية ووضع العلامات فلوري لاحق مع الأجسام المضادة Cy3 الثانوية. وبالإضافة إلى ذلك، تم إجراء النووية لمكافحة وصمة عار مع دابي (4،6-diamidino-2-phenylindole) (الشكل 1). <img src="/files/ftp_upload/3936/3936fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. photomicrographs نيون الرؤية وكشف مناعي من العصبونات الحركية المضادة للCHAT الأجسام المضادة (أحمر) ونوى الخلايا لمكافحة وصمة عار بواسطة دابي (الأزرق) في الماوس قطني القرن الأمامي للنخاع الشوكي لwildtype (بالوزن) (على اليسار) و 1 الهيئة العامة للسدود G93A المعدلة وراثيا (TG) (على اليمين) الماوس في سن ال 130 يوما. مقياس شريط: 40 ميكرون. كما أن تحليل المناعى للالهيئة العامة للسدود والفئران G93A ليس في نطاق أساسي من هذه المادة يرجى الاطلاع على المنشور الأصلي الذي اتسمت هذه الفئران المعدلة وراثيا وتلك الأكثر حداثة التي تدرس المناهج العلاجية للإشارة أخرى 1، 5، 6. وينبغي إذا يجب التمييز بين الآثار العلاجية على مستوى immunohistological محددة بوضوح أن تطبق خوارزميات التقييم الكمي يدعمها البرنامج stereological (انظر على سبيل المثال 7).

<ol><li>Gurney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu%2C+Zn+superoxide+dismutase+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu, Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).</li>
<li>Weydt, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+disease+onset+and+progression+in+the+SOD1+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Assessing disease onset and progression in the SOD1 mouse model of ALS.</a> Neuroreport. 14 (7), 1051-1054 (2003).</li>
<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+phenotyping+strategies+for+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Behavioral phenotyping strategies for mutant mice.</a> Neuron. 57 (6), 809-818 (2008).</li>
<li>Miana-Mena, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+methods+to+characterize+the+G93A+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph.+Lateral+Scler.+Other+Motor+Neuron+Disord%22%5BJournal%5D)">Optimal methods to characterize the G93A mouse model of ALS.</a> Amyotroph. Lateral Scler. Other Motor Neuron Disord. 6 (1), 55-62 (2005).</li>
<li>Zhong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+protein+C+therapy+slows+ALS-like+disease+in+mice+by+transcriptionally+inhibiting+SOD1+in+motor+neurons+and+microglia+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Activated protein C therapy slows ALS-like disease in mice by transcriptionally inhibiting SOD1 in motor neurons and microglia cells.</a> J. Clin. Invest. 119 (11), 3437-3449 (2009).</li>
<li>Pitzer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granulocyte-colony+stimulating+factor+improves+outcome+in+a+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Granulocyte-colony stimulating factor improves outcome in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Brain. 131 (Pt. 12), 3335-3347 (2008).</li>
<li>Gowing, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ablation+of+proliferating+microglia+does+not+affect+motor+neuron+degeneration+in+amyotrophic+lateral+sclerosis+caused+by+mutant+superoxide+dismutase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Ablation of proliferating microglia does not affect motor neuron degeneration in amyotrophic lateral sclerosis caused by mutant superoxide dismutase.</a> J. Neurosci. 28 (41), 10234-10244 (2008).</li>
<li>Scott, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((interpretation+of+studies+in+the+standard+murine+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph+Lateral+Scler%22%5BJournal%5D)">interpretation of studies in the standard murine model of ALS.</a> Amyotroph Lateral Scler. 9 (1), 4-15 (2008).</li>
<li>Turner, B. J., Talbot, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenics%2C+toxicity+and+therapeutics+in+rodent+models+of+mutant+SOD1-mediated+familial+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Transgenics, toxicity and therapeutics in rodent models of mutant SOD1-mediated familial ALS.</a> Prog Neurobiol. 85 (1), 94-134 (2008).</li>
<li>Corse, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+testing+of+neuroprotective+neurotrophic+factors+in+a+model+of+chronic+motor+neuron+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Preclinical testing of neuroprotective neurotrophic factors in a model of chronic motor neuron degeneration.</a> Neurobiol Dis. 6 (5), 335-346 (1999).</li>
<li>Knippenberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significance+of+behavioural+tests+in+a+transgenic+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28ALS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Significance of behavioural tests in a transgenic mouse model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS).</a> Behav Brain Res. 213 (1), 82-87 (2010).</li>
<li>Burgess, R. W., Cox, G. A., Seburn, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuromuscular+disease+models+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Neuromuscular disease models and analysis.</a> Methods Mol. Biol. 602, 347-393 (2010).</li>
<li>Hayworth, C. R., Gonzalez-Lima, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-symptomatic+detection+of+chronic+motor+deficits+and+genotype+prediction+in+congenic+B6.SOD1%28G93A%29+ALS+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Pre-symptomatic detection of chronic motor deficits and genotype prediction in congenic B6.SOD1(G93A) ALS mouse model.</a> Neuroscience. 164 (3), 975-985 (2009).</li>
<li>Ludolph, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+preclinical+animal+research+in+ALS%2FMND%3A+A+consensus+meeting%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph+Lateral+Scler%22%5BJournal%5D)">Guidelines for preclinical animal research in ALS/MND: A consensus meeting.</a> Amyotroph Lateral Scler. 11 (1-2), 38-45 (2010).</li>
<li>Boillee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Onset+and+progression+in+inherited+ALS+determined+by+motor+neurons+and+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Onset and progression in inherited ALS determined by motor neurons and microglia.</a> Science. 5778 (3), 1389-1392 (2006).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

و(G93A) SOD1 نموذج الفأر الوراثية هو نموذج حيواني قيمة لدراسة مسار مرض فقدان العصبون الحركي تقدمية مماثلة لمرض التصلب الجانبي الإنسان 8. وقد تم تقييم مجموعة متنوعة من نماذج معاملة مختلفة في هذا النموذج، وتمثل الأساس للاختبار في وقت لاحق الإنسان 8-10 الدراسات السريرية. من أجل أن تكون قادرة على الكشف عن اختلافات كبيرة في دراسة العلاج التجريبي في هذه الفئران، فإنه من الأهمية البارزة لتشمل ما لا يقل عن 24 القمامة المتطابقة المتوازن بين الجنسين الفئران من الخلفية ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td> الصانع </td><td> طلب معلومات </td></tr><tr><td> السلوكية اختبار </td><td></td><td></td></tr><tr><td> روتا رود لالفئران </td><td> أوغو باسيلي، Comerio، إيطاليا </td><td> # 47600 </td></tr><tr><td> شنق جهاز سلك </td><td> تفصيل </td><td></td></tr><tr><td colspan="3"></td></tr><tr><td> الحبل الشوكي التحضير </td><td></td><td></td></tr><tr><td> عملية الجدول تشغيل مصباح قفازات واقية </td><td></td><td></td></tr><tr><td> &quot;ايريس&quot; مقص، إلى جانب الزاوية </td><td> أدوات العلوم الدقيقة، هايدلبرغ، ألمانيا </td><td> 14063-09 </td></tr><tr><td> مقص الربيع كوهان، Vannas، على التوالي </td><td> أدوات العلوم الدقيقة، هايدلبرغ، ألمانيا </td><td> 15000-10 </td&gt; </tr><tr><td> الملقط الصغير </td><td> Hammacher، زولينغن، ألمانيا </td><td> HWC 111-10 </td></tr><tr><td> مشرط &quot;präzisa زائد&quot; </td><td> Dahlhausen، كولونيا، ألمانيا </td><td> 11.000.00.510، والتين 10 </td></tr></tbody></table>

السريرية اختبار وإزالة العمود الفقري الحبل في الفأر نموذج لتصلب الأنسجة العضلية الجانبية (als)

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS)

التصلب الجانبي (ALS) هو اضطراب الاعصاب المميتة مما أدى إلى تدهور تدريجي من العصبونات الحركية. ذروة بداية نحو 60 عاما لهذا المرض متفرقة ونحو 50 سنوات لمرض عائلي. نظرا لمساره التدريجي، 50٪ من المرضى يموتون في غضون 30 شهرا من ظهور الأعراض. من أجل تقييم خيارات العلاج رواية لهذا المرض، وقد ولدت نماذج الماوس الوراثية من المرض على أساس عائلي الإنسان طفرات في الجين الهيئة العامة للسدود، مثل الطفرة (G93A) SOD1. أهم الجوانب التي لا بد من تقييمها في النموذج هي عموما البقاء على قيد الحياة، وبطبيعة الحال السريرية وظيفة الحركة. هنا، علينا أن نبرهن على التقييم السريري، وتبين البدء في عمل اختبارين محرك السلوكية وتوفير أنظمة التسجيل الكمي لجميع المعلمات. لأن في تحليل معمق لنموذج الفأر المرض وعادة ما يتطلب دراسة المناعى من الحبل الشوكي، وعلينا أن نبرهن إعداده بالتفصيل تطبيق فعلrsal استئصال الصفيحه طريقة. وأظهرت النتائج النسيجية نموذجية. فإن التطبيق الشامل لطرق الفحص صورت في دراسات عن نموذج الفأر من المرض تمكن الباحث لاختبار موثوق الخيارات العلاجية في المستقبل والتي يمكن أن تشكل أساسا لتجارب اكلينيكية على البشر في وقت لاحق.

يتم فحص الفأر نموذج لتصلب الأنسجة العضلية الجانبية (ALS) سريريا وسلوكيا. كشرط أساسي لتحليل 1 immunohistological المرافق وصفت إعداد الحبل الشوكي بالتفصيل.

السريرية اختبار وإزالة العمود الفقري الحبل في الفأر نموذج لتصلب الأنسجة العضلية الجانبية (ALS)

يُعد التصلب الجانبي الضموري (ALS) اضطراباً تنكسياً عصبياً مميتاً يؤدي إلى تنكس تدريجي في العصبونات الحركية. وتكون ذروة ظهور المرض في سن الستين تقريباً...

مرحبًا، اسمي لار تيرنر. أنا باحثة ما بعد الدكتوراه في قسم أمراض الأعصاب بجامعة إنغهام، ألمانيا. مرحبًا، اسمي لين غوندا.أنا طالب في كلية الطب وأقوم بإعداد رسالة التخرج الخاصة بي في هذا المختبر. سنعرض لكم اليوم الاختبار السريري لـ SODG 93، وهو نموذج موس (Moss) للتصلب الجانبي الضموري. علاوة على ذلك، سنقوم بتوضيح اختبار الوظيفة الحركية باستخدام ما يسمى باختبار الروتار (rotor test)، بالإضافة إلى اختبار آخر للوظيفة الحركية وهو اختبار التشبث بالسلك المعلق (hanging Wire grip) من أجل إجراء تحليل مناعي.بعد الاختبار الوظيفي لفئران a s، تتكون الإجراءات الضرورية من إزالة الحبل الشوكي، وعصب STIC، وعضلة gastroc. نريد عرض هذه الإجراءات الجراحية بالتفصيل، وسنعرض بعض النتائج المناعية النموذجية في النهاية. حسناً، لنبدأ الآن بالاختبارات السريرية.هذا فأر من النوع البري (wild type) يتحرك بحرية ولا يظهر عليه أي أعراض سريرية مثل رعشة العضلات أو الشلل وفقاً لنظام التصنيف السريري لدينا، وهو ما يعادل الدرجة الرابعة. أما هذا فهو فأر مُعدل جينياً مصاب بمرض ALS.في مرحلة مبكرة من المرض، يظهر الحيوان رعشة شديدة في الطرف الخلفي الأيمن تصنفه ضمن الدرجة SCORE three E. وتصنف التشوهات الشديدة في المشية هذا الحيوان ضمن الدرجة two. أما سحب طرف خلفي واحد على الأقل فيُصنف كدرجة سريرية one. وفي اختبار السلك المعلق، يتم تقييم القوة العضلية الخام. يوضع كل فأر على سلك مصنع خصيصاً ويتم قلبه بحذر رأساً على عقب فوق قاعدة مغطاة بالقش.بعد التدريب لثلاث مرات متتالية لمدة 180 ثانية على الأقل، يتم قياس زمن الكمون قبل السقوط. تُمنح كل فأرة ما يصل إلى ثلاث محاولات للتمسك بالغطاء المقلوب لمدة أقصاها 180 ثانية، ويتم تسجيل أطول فترة زمنية مقارنة بالفأرة من نوع السلك الأبيض على الجانب الأيمن. أما الفأرة المعدلة وراثياً بـ plaque على الجانب الأيسر فهي ضعيفة جداً وتسقط من على الغطاء قبل الوصول إلى الحد الأقصى.يُستخدم جهاز قضيب الدوران (Rotor rod) لقياس التنسيق الحركي والتوازن والقدرة على التعلم الحركي. ويتطلب الأداء الجيد درجة عالية من التنسيق الحسي الحركي. يتكون الجهاز من محور دوار يعمل بمحرك ويتم التحكم فيه بواسطة الكمبيوتر، وخمس مسارات لخمسة فئران.يتم الكشف عن تعثر الفئران تلقائيًا من خلال الضغط على اللوحة البلاستيكية السفلية. بعد التدريب لثلاث مرات متتالية لمدة لا تقل عن 180 ثانية وبسرعة ثابتة تبلغ 15 دورة في الدقيقة، يتم قياس الوقت الذي يمكن أن يظل فيه الحيوان على الروتاتور الدوار. يخضع كل حيوان لثلاث محاولات ويتم تسجيل أطول فترة زمنية قبل السقوط.تجري الفأرة من النوع البري السليم على الجانب الأيسر دون صعوبة على قضيب الدوران. وفي المقابل، تعاني الفأرة المعدلة وراثياً a s mo على الجانب الأيمن من مشكلات شديدة حتى في البقاء على قضيب الدوران، وتنزلق بعد فترة كما يُلاحظ من الخلف. يمكنك رؤية صعوبات الجري الشديدة للفأرة retre الموجودة على اليسار.وبالمقارنة مع فأر wire tap السليم، فإنه لا يستطيع مواكبة سرعة القضيب الدوار ولا يمكنه الدفع للأعلى باستخدام أطراف HIN. ومن أجل إجراء تحليل كيميائي مناعي للنخاع الشوكي، يجب تضحية الحيوانات. ومن المهم جداً اتباع الإرشادات المحلية بدقة دائماً لضمان السلوك السليم في تجارب الحيوانات.في هذا السياق، وفي هذا العرض الموجز والمبسط للعمود الفقري والأنسجة المحيطة به، يتم توضيح البنى التشريحية الرئيسية. سنقوم بوضع الحيوان على جانبه البطني والبدء في تجهيز العضلات من الكيس الظهري. وبعد إزالة النسيج العضلي، سنصل إلى العمود الفقري الذي يحيط بالنخاع الشوكي.بعد تضحية الحيوان وترويحه بمحلول يحتوي على البارافورمالدهيد، يمكن إزالة النخاع الشوكي. يُوضع الحيوان على طاولة عمليات وتُثبت أطرافه بالكامل على الجوانب من أجل كشف الجزء الخلفي من الفأر. يتم ترطيب الحيوان لتسطيح غطاء الشعر وتسهيل إجراء الشق الجلدي التالي.لهذا الغرض، يُستخدم مشرط حاد. يجب الحرص على شد الجلد نحو الجانبين. ولتسهيل عملية القطع، يتم تحضير عضلة الساق.يجب أيضاً إجراء شق في جلدهم. وبعد اكتمال شق الجلد، يتم سحبه بلطف إلى الجانب. وباستخدام ملقط، نقوم بإزالة عضلات الساق والعصب الوركي، ثم نواصل الوصول إلى الحبل الشوكي ونضع الحيوان على طاولة عمليات جديدة.الآن أصبح من السهل تحديد الجمجمة والرقبة والعضلات والعمود الفقري. وبعد تحديد كل هذه التراكيب، يمكن الانتقال بسهولة إلى الخطوة التالية، حيث يجب إزالة عضلات الرقبة والرابط النخاعي.يجب توخي الحذر لتجنب إجراء شق عميق للغاية قد يؤدي إلى إصابة العمود الفقري. في الخطوة التالية، تُزال العضلات المجاورة للفقرات بالكامل للكشف عن العمود الفقري. ومن أجل الوصول إلى العمود الفقري، يجب إجراء عدة عمليات استئصال.نبدأ من الجزء العنقي من العمود الفقري، بما في ذلك المفصل الأطلسي القذالي. ولإجراء عملية استئصال الصفيحة الفقرية، يجب علينا قطع القوس الفقري لنتمكن من إزالة جميع النتوءات الفقرية من جسم الفقرة. وكما تم توضيحه سابقاً، تبدأ عملية استئصال الصفيحة الفقرية بقطع الأقواس الفقرية.بعد ذلك، يمكن سحب الصفاق بعيداً. ومرة أخرى، يجب توخي الحذر لعدم إصابة الحبل الشوكي لأن هناك المزيد من الأقواس التي يجب إزالتها. ومن المفيد جداً استخدام مقصات مائلة لعمل شقوق في عدة أقواس فقارية من كلا الجانبين في آن واحد.بعد ذلك، اسحب النتوءات الظهرية لإزالة الصفائح الفقرية تماماً. كما يظهر في اللقطة القريبة، يجب إدخال المقص بعناية في أقصى الجانب الوحشي من القناة الشوكية. يجب إزالة الأجزاء الوحشية المتبقية من العمود الفقري لتسهيل الإزالة الكاملة للنخاع الشوكي لاحقاً.تعد ما تسمى بالتوسعات العنقية والقطنية من المعالم التشريحية للنخاع الشوكي. بعد الانتهاء من عمليات الاستئصال للنخاع الشوكي بأكمله، تأكد من قطع جميع الجذور البطنية للنخاع الشوكي وتحريره من الأم الجافية للسحايا. بعد ذلك، يتم قطع النخاع الشوكي العنقي.يتم البدء في الإزالة مرة أخرى من الجهة القحفية. يجب لمس النخاع الشوكي بحذر شديد لتجنب إلحاق الضرر بهذا النسيج، لأن ذلك قد يؤدي إلى قيود شديدة في التحليل المناعي الكيميائي لاحقاً. ويستمر استئصال النخاع الشوكي وصولاً إلى المستوى الصدري ثم المتابعة حتى الجزء القطني.يتم قصها أخيراً مرة أخرى هذه المرة عند جانب الذيل الحصاني. والآن أصبح بإمكاننا تحريرها بالكامل. هنا ترون الحبل الشوكي موضوعاً بجوار موقعه الأصلي تماماً في عمود RAL.في النهاية، يتم وضعه في محلول تثبيت لاحق من Paraform Hyde. وكمثال كلاسيكي للتحليل الكيميائي النسيجي المناعي للنخاع الشوكي، يمكنك استخدام جسم مضاد يتعرف على choline, acetyl transferase لتحديد العصبونات الحركية في القرن الأمامي للنخاع الشوكي. تظهر هنا مجموعة كبيرة من العصبونات الحركية في حيوان من النوع البري السليم.في المقابل، يُظهر الحيوان المعدل وراثياً المصاب بـ LS في المرحلة النهائية عدداً أقل بكثير من العصبونات الحركية في القرن الأمامي. بمشاهدة هذا المقال المرئي، يجب أن تكون قد تعلمت الفحص السريري الأساسي لنموذج الفأر SODG 93 المصاب بالتصلب الجانبي الضموري.تم استعراض اختبارين للسلوك الحركي وهما اختبار الدوار (rotor test) واختبار السلك المعلق (hanging wire test). ويوفر هذان الاختباران إمكانية جيدة لتقييم الوظيفة الحركية الأساسية، كما أنهما سهلان في التنفيذ، وحسّاسان في الكشف عن القصور الحركي، وفعالان من حيث الوقت.يتكون الجزء الرئيسي من هذا الفيديو من عرض لتقنية تحضير الحبل الشوكي. ويمكن تطبيق هذه التقنية بالطبع على أي نموذج مرض آخر في الفئران، وهي خطوة أساسية للتحليل الكيميائي المناعي اللاحق لباثولوجيا المرض في الحبل الشوكي. شكراً لكم على المشاهدة.نأمل أن يكون مقال الفيديو هذا مفيداً لتجاربكم المستقبلية.

clinical-testing-spinal-cord-removal-mouse-model-for-amyotrophic

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

العصبية زرع السلائف هي استراتيجية واعدة لحماية و / أو استبدال / عنق الرحم المختلة وظيفيا فقدت الخلايا العصبية الحركية في الحجابي إصابة الحبل الشوكي (النخاع الشوكي) ، واضطراب في الخلايا العصبية الحركية ، التصلب الضموري الخطوط الفرعية (ALS). ونحن نقدم على بروتوكول لتسليم خلية لعنق الرحم القرن بطني الحبل الشوكي في القوارض نماذج من المرض واصابات النخاع الشوكي.

داخل النخاع زرع الخلايا لاستهداف القرن بطني عنق الرحم في التصلب الجانبي وصدمة إصابة النخاع الشوكي

المصدر: Pourshafie, N., et al. التوصيل الجهازي للحمض النووي الريبي الصغير باستخدام النمط المصلي للفيروس المرتبط بالغدة المؤتلف 9 لعلاج الأمراض العصبية العضلية في القوارض. J. Vis. Exp. (2018).في هذا الفيديو ، يخضع ضمور عضلي في العمود الفقري والبصلي أو الفأر المتأثر ب SBMA لحقن وريد الذيل لنواقل AAV المؤتلفة (النواقل المرتبطة بالغدان) التي تحمل بلازميد يشفر microRNA العلاجي. ينتج الناقل الحمض النووي الريبي الصغير الذي يرتبط ب AR (مستقبل الأندروجين) -mRNA (الحمض النووي الريبي المرسال) ، مما يؤدي...

حقن النواقل المؤتلفة المرتبطة بالغدة في نموذج فأر ضمور عضلي في العمود الفقري والبصلي

يصف بروتوكول الفيديو هذا طريقة حساسة وموثوقة وسريعة لتقييم العجز العصبي العضلي في نموذج الفأر المعدل وراثيا للتصلب الجانبي الضموري.

A السريع المظهري العصبية نظام تسجيل النقاط لتقييم مرض في التقدم SOD1-G93A نموذج الفأر من ALS

توضح هذه المقالة طريقة لتوليد إصابة ضغط الحبل الشوكي القابلة للتكرار (SCI) في فأر حديثي الولادة. يوفر النموذج منصة مفيدة لدراسة آليات اللدونة التكيفية التي تكمن وراء الانتعاش الوظيفي التلقائي.

وحديثي الولادة ماوس الحبل الشوكي ضغط إصابة نموذج

وصف هنا هو نهج فرز السلوكية نظموا التي يمكن استخدامها لفحص للمركبات التي تظهر في فعالية الجسم الحي على السلوكيات الحركية المعرفية والوظيفية في نماذج الماوس المعدلة وراثيا من β-الداء النشواني و تاوباثي. يتم تحسين هذه الأساليب لمركبات الشاشة للنشاط في مهام الذاكرة قصيرة الأجل والعمل.

تقييم التناوب العفوي، التعرف على الكائن الرواية وتسلسل الأطراف في الماوس المعدلة وراثيا نماذج من اميلويد β وتاور الاعتلال العصبي

قياس التوصيل العصب أداة مفيدة لتقييم نماذج الماوس من نيوروديجينيريشن ولكن كثيرا ما لا تنطبق إلا على تحفيز العصب الوركي في هيندليمبس. وهنا يصف لنا تقنية لقياس العضلات مجمع إمكانات العمل (CMAP) في فيفو في العضلات فوريليمب الماوس معصب الضفيرة ريحي.

في فيفو القياس الكهربية من إمكانات عمل العضلات مركب من الأمامية في نماذج الماوس من ضمور الخلايا العصبية الحركية

يصف هذا البروتوكول كيفية إنشاء عملية استئصال لامينكومي دقيقة للتحريض على إصابة الحبل الشوكي المستقرة من نوع الترانسكشن في نموذج الماوس ، مع الحد الأدنى من الأضرار الجانبية لأبحاث إصابة الحبل الشوكي.

تحريض كامل من إصابة الحبل الشوكي من نوع الترانصيب في الفئران

يظهر هنا جهاز كدمة آلي جديد لإصابة الحبل الشوكي للفئران ، والذي يمكنه إنتاج نماذج كدمة إصابة الحبل الشوكي بدقة بدرجات متفاوتة.

نموذج الصدمة الآلي لإصابة الحبل الشوكي الطارئ في الفئران

يصف البروتوكول الحالي تطوير نموذج فئران قابل للتكرار للورم الدبقي في الحبل الشوكي عن طريق حقن الخلايا السرطانية في الفضاء الفقري ، مما يوفر نهجا أكثر فعالية وأقل توغلا للبحث والتطوير العلاجي.

الزرع الجراحي للخلايا السرطانية في الحبل الشوكي للفئران

تحدث ترنح البوليغلوتامين الشوكي المخيخي نتيجة توسعات CAG التي تنتج بروتينات عرضة للتجمع. يصف هذا البروتوكول إنتاج الناقلات، وتوصيل الإشارات المجسمة، وتحليل الشوائب وفقدان العلامات العصبية، موفرا منصة محكمة لدراسة الآليات وتقييم العلاجات المستهدفة للأمراض التنكسية العصبية.

علم الأمراض المخططة الناتج عن الفيروسات اللينتيفيرالية كنموذج ما قبل سريري لترنح الدماغ العمودي الدماغي المضحك بالبوليغلوتامين

تفصل هذه المقالة طرق التوصيل داخل الفصائل للعلاجات الموجهة للجهاز العصبي المركزي في الفئران البالغة، مع التركيز على دقة البروتوكول وتمكين الحقن المتكرر. يتضمن نتائج دراسة تحقق حيث قللت أوليغونوكليوتيدات مضادة من تعبير SOD1 الطافور في فئران نموذج SOD1-ALS، مما يدعم فائدة هذا النهج في البحث ما قبل السريري على الأمراض التنكسية العصبية.

حقن الأسفل داخل القضيب لجرعات SOD1-ASOs لاستهداف الجهاز العصبي المركزي بدقة وفعالية تنبؤية في فئران ALS المصابة ب SOD1-G93A البشرية

تعلم تقييم الوظائف الحركية في نموذج الفأر SOD1-G93A لدراسة التصلب الجانبي الضموري. يوضح الفيديو اختبارات السلك المعلق ودوار التوازن واستئصال الحبل الشوكي للتحليل المناعي النسيجي.

السريرية اختبار وإزالة العمود الفقري الحبل في الفأر نموذج لتصلب الأنسجة العضلية الجانبية (ALS)

استكشف المزيد من الفيديوهات