Name: زرع البنكرياس من الجزر في الكبسولة الكلى من الفئران من السكري (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-31T23:37:26.000+00:00
Duration: 10 min 43 s
Description: تعلم تقنية زرع جزر البنكرياس تحت الكبسولة الكلوية للفئران السكرية. تقلل هذه الطريقة الإجهاد على الخلايا والفئران المستقبلة وتُحسّن نتائج الزرع في نماذج السكري.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

UCSF مركز السكري. NIH UCSF الأساسية DERC جزيرة. JDRF. ايفسكان شركة جونسون آند جونسون الشركة.

إعداد الفشوت لزرع (تكساس) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحت المجهر المقلوب ، ومن ناحية اختيار الجزر باستخدام pipetman P200 ومباشرة من طرف الماصة الجزر مثقف في صفيحة 100mm. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 100 عدد الجزر في وقت واحد ونقل في كل أنبوب microcentrifuge (~ 500 الجزر / أنبوب / الماوس). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح لتسوية الجزر إلى أسفل الأنابيب microcentrifuge. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعادل واحد في جزيرة بيليه pipetman P200 (وضعت في 130ul) باستخدام الماصة على التوالي تلميح رقيقة الجدار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع محول أنبوب السيليكون أكثر من طرف الحقنة. إدراج طول أنابيب PE50 في محول السيليكون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتعطل pipetman إلى جانب غطاء المحرك والشريط الأنبوب PE50 على الحائط غطاء أعلى من الجزر الصغيرة في الطرف. وسوف تسمح هذه الجزر لتسوية فقط في غيض من ماصة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الجزر في أنابيب PE50 عن طريق الاتصال ببطء pipetman وتحريك الجزر في أنابيب PE50 ، والحرص على عدم طرد الجزر من نهاية المباراة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل عقدة في نهاية مشطوف من أنابيب PE50. مع الحفاظ على شبك ، قطع الأنابيب محول السيليكون من pipetman وتأمين شبك مع محول السيليكون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الجزر ، في PE50 أنابيب ، جنبا سيليكون متلوى أنابيب محول إلى أسفل ، إلى 15 مليلتر المخروطية مع مل الماصة 5 و قطع الشريط أنابيب PE50 على جانب الماصة 5 مل لمنع الشباك من أنابيب PE50 حين الطرد المركزي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي في conicals PE50/15mL إلى 1000 دورة في الدقيقة وإيقاف الطرد المركزي. (إعداد التحضيرات أبدا أكثر من 10 جزيرة في وقت واحد). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أنبوب مكان على الجليد. </li></ol> إعداد فأرة للزراعة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفئران مع isofluorane أو مع الكيتامين / Xylexene (انظر بروتوكول الإعداد). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التخدير قد اتخذت تؤثر ، حلق الجناح الأيسر من الماوس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المسحة جلد الفأر ، ومركز التدريجي ، مع مسحة بوفيدون اليود ثم تمحو مع مسحة ETOH. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> موقع الكلية اليسرى (الحق فقط للطحال). إجراء شق صغير في الجلد ، مما يعرض في الغشاء البريتوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق صغير في الصفاق تعريض الكلى. والحفاظ على شق صغير يساعد في الحفاظ على الكلى وأثار المكشوفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق ضغط خفيف على جانبي الشق ، ورفع البوب ​​أو الكلى من الماوس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على رطوبة الكلى عن طريق تطبيق المالحة طبيعية مع مسحة من القطن يميل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الحقنة 23 أو 25 إبرة قياس ، وجعل خدش صغير على الجهة اليمنى في الكلى ، وخلق نك في كبسولة الكلى ، ليست عميقة جدا أو كبيرة جدا. </li></ol> زرع الفشوت ملاحظة : في حين يجري حاليا إعداد الماوس لتكساس ، والشخص الثاني يجب إعداد جزيرة هاملتون زرع المسمار محرك المحاقن. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأنبوب ببطء محول السيليكون من أنابيب PE50 مع الحفاظ على شبك في الأنابيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان الطرف الآخر من الأنبوب PE50 في سيليكون أنابيب محول ووضع أنابيب محول سيليكون على طرف ماصة تعلق على &quot;المسمار محرك&quot; هاملتون الزجاج المحاقن. الافراج عن ببطء شبك في أنابيب PE50 ، والتأكد من أن الجزر لا يتسرب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقدم الجزر ببطء لغيض من أنابيب PE50 باستخدام &quot;المسمار&quot; آلية ، ولكن تبقى فقاعة الهواء الصغيرة في الجزء الأمامي من الجزر في أنابيب PE50. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في النك المحرز في الكلى ، والشريحة بعناية في أنابيب تحت PE50 الكبسولة ، مما يجعل جيب صغيرة. يكون حريصا جدا على ألا مجوب الكلى أو من خلال ثقب الكبسولة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أنها تساعد على إبقاء المنطقة رطبة وكبسولة مع القطن المالحة الجنتاميسين العادي يميل مسحة غارقة ؛ كبسولة الجافة سوف يتمزق بسهولة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحرك بلطف الأنابيب في كل الاتجاهات ، وخلق &quot;جيب&quot; لزرع جزيرات للراحة. تذكر أن تطبيق المالحة العادي إضافية للحفاظ على المنطقة رطبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وبتوجيه من الشخص الذي فتح الفأرة والذي وضع أنابيب تحت PE50 كبسولة الكلى ، والشخص الثاني ، الذي أعد الماوس وهاملتون حقنة الزرع ، يتقدم ببطء الجزر تحت الكبسولة ، في داخل &quot;جيب&quot; ، وراء فقاعة الهواء الصغيرة التي ألقاها أنابيب PE50 ، حتى في الجزر كلها المزروعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأنبوب ببطء PE50 وجافة في منطقة ذات المسحة الجافة ويكوي بعناية النك مع الحرارة المنخفضة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام قطعة من القطن الجاف يميل المسحة ، تأكد من جميع النزيف قد توقف. بمجرد توقف النزيف ، وإعادة ترطيب الكلى مع المالحة عقيمة ، واستبدالها بلطف الكلى البريتوني في قبل إغلاق الفأر مع خياطة الجلد والمواد الغذائية. </li></ol> إغلاق / إحياء ماوس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق الصفاق مع غرزة باستخدام خيوط الحرير تشغيل 5-0 ث / إبرة C - 6 19mm. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملقط باستخدام رسم جانبي شق الجلد معا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التيلة الجلد مع 2 أو 3 من السلع الاساسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف البشرة من الفأرة من أي دم ، وذلك باستخدام قطعة من القطن المسحة ويميل ساليه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> علاج فورا الماوس مع الحقن تحت الجلد من فلونيكسين والبوبرينورفين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في قفص ، التي يتم وضعها على وسادة التدفئة أو تحت مصباح التدفئة ، حتى الماوس نشط بشكل كامل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الجلد من السلع الاساسية في 2 أسابيع. </li></ol>

<ol><li>Tang, Q., Henriksen, K. J., Bi, M., Finger, E. B., Szot, G., Ye, J., Masteller, E. L., McDevitt, H., Bonyhadi, M., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro-expanded+antigen-specific+regulatory+T+cells+suppress+autoimmune+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">In vitro-expanded antigen-specific regulatory T cells suppress autoimmune diabetes.</a> J Exp Med. 199, 1455-1465 (2004).</li>
<li>Rulifson, I. C., Szot, G. L., Palmer, E., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inability+to+induce+tolerance+through+direct+antigen+presentation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Inability to induce tolerance through direct antigen presentation.</a> Am J Transplant. 2, 510-519 (2002).</li>
<li>Lenschow, D. J., Zeng, Y., Hathcock, K. S., Zuckerman, L. A., Freeman, G., Thistlethwaite, J. R., Gray, G. S., Hodes, R. J., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+transplant+rejection+following+treatment+with+anti-B7-2+and+anti-B7-1+antibodies.+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Inhibition of transplant rejection following treatment with anti-B7-2 and anti-B7-1 antibodies. Transplantation.</a> Transplantation. 60, 1171-1178 (1995).</li>
<li>Lenschow, D. J., Zeng, Y., Thistlethwaite, J. R., Montag, A., Brady, W., Gibson, M. G., Linsley, P. S., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+survival+of+xenogeneic+pancreatic+islet+grafts+induced+by+CTLA4lg%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Long-term survival of xenogeneic pancreatic islet grafts induced by CTLA4lg.</a> Science. 257, 789-792 (1992).</li>
</ol>

هذا البروتوكول يوفر خيار عملي وفعال لإيصال نظيفة بسهولة والجزر أو الخلايا تحت الكبسولة الكلى السكري أو من الفئران العادية. أسلوب التركيز والتكوير الجزر أو الخلايا في أنابيب التسليم النهائي (PE50) تستخدم لزرع الخلايا تحت الكبسولة الكلى توفر طريقة سهلة وفعالة لزرع الخلايا مع الحد من أي ضغوط لا داعي لها على الخلايا أو الماوس.

<table><tbody><tr><td>قفازات جراحية</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-394-95(sz)</td><td></td></tr><tr><td>إسفنجات تعقيم جراحية</td><td>Moore Medical</td><td>42940AK</td><td></td></tr><tr><td>ملاقط</td><td>Miltex Inc.</td><td>6-114 and 6-26</td><td>2 بأسنان، 2 مستقيمة</td></tr><tr><td>مقصات تشريح n=2</td><td>Miltex Inc.</td><td>5-290</td><td></td></tr><tr><td>شفرة أوستر (شفرة مقاس 40)</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-305-10B</td><td></td></tr><tr><td>وسادات شاش معقمة 4x4</td><td>Moore Medical</td><td>08252AK</td><td></td></tr><tr><td>وسادات بوفيدون يود</td><td>Moore Medical</td><td>08486AK</td><td></td></tr><tr><td>وسادات كحولية</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-819-2</td><td></td></tr><tr><td>وسادة تدفئة</td><td>Moore Medical</td><td>42508AK</td><td></td></tr><tr><td>إبر 23G أو 25G</td><td></td><td></td><td>بطول 1&quot;</td></tr><tr><td>محلول Cidex</td><td>Moore Medical</td><td>07535AK</td><td>لتنظيف وتعقيم الأدوات</td></tr><tr><td>أنابيب بولي إيثيلين PE50</td><td>BD Biosciences</td><td>427411</td><td>PE50, 0.965mm O.D. x 0.58mm I.D.</td></tr><tr><td>محلول Cidex + 28 day</td><td>Moore Medical</td><td>35625AK</td><td></td></tr><tr><td>أنابيب سيليكون</td><td>Spectrum Chromat.</td><td>123732</td><td>5/32&amp;#8221;OD x 1/32&amp;#8221; ID</td></tr><tr><td>حاوية تعقيم أدوات</td><td>Moore Medical</td><td>39074AK</td><td></td></tr><tr><td>رؤوس ماصات مستقيمة</td><td>USA Scientific, Inc.</td><td>1111-0810</td><td>معقمة</td></tr><tr><td>حقنة زجاجية بمحرك لولبي</td><td>Hamilton Co</td><td>1001</td><td></td></tr><tr><td>أداة كيّ</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS230</td><td></td></tr><tr><td>حامل إبر</td><td>Moore Medical</td><td>41-067</td><td></td></tr><tr><td>حرير 5-0</td><td>LOOK Surgical</td><td>754B</td><td>للخياطة (6-C)</td></tr><tr><td>مسحة قطنية</td><td>Moore Medical</td><td></td><td></td></tr><tr><td>دباسة autoclip مقاس 9 مم</td><td>BD Biosciences</td><td>7630</td><td></td></tr><tr><td>دبابيس مقاس 9 مم</td><td>BD Biosciences</td><td>7631</td><td></td></tr><tr><td>مزيل دبابيس مقاس 9 مم</td><td>BD Biosciences</td><td>7637</td><td></td></tr></tbody></table>

زرع البنكرياس من الجزر في الكبسولة الكلى من الفئران من السكري

Transplantation of Pancreatic Islets Into the Kidney Capsule of Diabetic Mice

وقد تم تطوير بروتوكول لدينا نظيفة وسهولة إيصال الجزر أو الخلايا تحت الكبسولة الكلى السكري أو من الفئران العادية. وجدنا أنه من الأسهل أن تركز على الجزر أو في خلايا الكريات في الأنبوب التسليم النهائي (PE50) تستخدم لزرع الخلايا تحت الكبسولة الكلى. توفر هذه التقنية على حد سواء بسرعة وسهولة مع الحد من أي ضغوط لا داعي لها على الخلايا أو الماوس. التحميل : تسويتها ، منتقاة ، ويستنشق بعناية أو خلايا الجزر مكعبات قبالة الجزء السفلي من أنبوب microcentrifuge 1.5 مل باستخدام pipetteman P200 وعلى التوالي ، غيض ماصة رقيقة الجدار. ومرفق طول أنابيب PE50 إلى الطرف ماصة تستخدم محول السيليكون الصغيرة الأنابيب. ويسمح للخلايا لتسوية ، في تلميح ، ومن ثم يتم نقلها إلى أنابيب PE50 عن طريق الاتصال برقم pipetteman ببطء. مرة واحدة في الخلايا قرب نهاية الأنبوب PE50 ، يتم إجراء شبك ويتم وضع أنابيب محول السيليكون خلال شبك. ينقل الأنبوب PE50 إلى 15 مل مل مخروطي يحتوي على قطع الماصة 5 ، وسجلت أكثر من الأنبوب PE50 جانب الماصة 5 مل لمنع الطرد المركزي خلال الشباك. ويسمح للخلايا لتصل إلى 1000 دورة في الدقيقة ، وتوقفت. زرع : الفئران هي تخدير المتلقي ، حلق ، وتنظيفها. يتم إجراء شق صغير في الجهة اليمنى من الماوس وتتعرض الكلى. يتم الاحتفاظ في الكلى ، والدهون ، والأنسجة رطبة مع مسحة ملحي عادي. ويرد في نهاية البعيدة للPE50 إلى محرك هاميلتون حقنة المسمار ، وتحتوي على معلومات سرية ماصة ، وذلك باستخدام أنابيب محول السيليكون. وقدم نيك صغيرة على الجانب الجهة اليمنى في الكلى ، وليس غاية ولا كبيرة عميق جدا. نهاية مشطوف من أنابيب PE50 ، أقرب الخلايا ، وضعت بعناية تحت الكبسولة ، يتم نقل الأنابيب حول بلطف لافساح المجال بينما ينظف المالحة العادية ؛ كبسولة الجافة يمكن أن تمزق بسهولة. يتم تسليم فقاعة الهواء الصغيرة تحت الكبسولة ببطء عن طريق الاتصال برقم محرك المسمار المحاقن. ثم يتم تسليم الجزر ببطء وراء فقاعة الهواء. يتم الاحتفاظ بمجرد تسليم الجزر التوازن الكلى وأكتوي من المواهب مع الحرارة المنخفضة. يتم وضع الكلى مرة أخرى في التجويف وتتم خياطة الجلد والغشاء البريتوني وتدبيس. وتعامل على الفور مع الفئران فلونيكسين والبوبرينورفين مربع وضعت في قفص على وسادة التدفئة.

وقد تم تطوير بروتوكول لدينا نظيفة وسهولة إيصال الجزر أو الخلايا تحت الكبسولة الكلى من الفئران. وتتركز الخلايا في الكريات في الأنابيب المستخدمة النهائية لزرع الخلايا تحت الكبسولة الكلى. سهولة هذا الأسلوب يقلل من الإجهاد على الخلايا والماوس.

تم تطوير البروتوكول الخاص بنا لتقديم الجزر أو الخلايا بشكل نظيف وسهل تحت كبسولة الكلية في الفئران المصابة بمرض السكري أو الفئران الطبيعية. وقد وجدنا أنه من الأسهل...

مرحباً، اسمي جريج زود. أنا في مركز جامعة كاليفورنيا بسان فرانسيسكو (UCSF) لمرض السكري في مختبر بلوستون، وسأوضح لكم اليوم كيفية زراعة جزر البنكرياس تحت كبسولة الكلية في الفئران المصابة بالسكري. تتضمن هذه العملية أخذ جزر البنكرياس التي تم تنقيتها من سلالات فئران متماثلة جينياً أو خيفية، ومن ثم تنقيتها وزراعتها تحت كبسولة الكلية في الفئران المصابة بالسكري.يمكن استخدام الفئران المصابة بداء السكري طبيعيًا مثل سلالة NOD أو الفئران التي يتم تحفيز الإصابة بالسكري لديها اصطناعيًا عن طريق حقن الستريبتوزوتوسين. الآن نحن مستعدون لاختيار الجزر البنكرياسية يدويًا. سأقوم باختيار الجزر البنكرياسية وعدّها أثناء سحبها باستخدام الماصة.سأترك أي أنسجة متبقية، ويمكنكم أن تروا من خلال طريقة انكسار الضوء في النسيج ما هي العوينة وما الذي لا يعد عوينة. ومن ثم أقوم بعدّ العوينات، حيث سأضعها في أنبوب سنترفيوج دقيق ونجمعها من أجل عملية الزرع.تبدو العروات (eyelets) أكثر كثافة، ولونها يميل إلى الاحمرار، بينما تبدو منطقة الـ ace في R أفتح لوناً وأكثر هشاشة، كما أنها تميل إلى اللون الأبيض. لذا، ستحصل على بعض أنسجة a في r أثناء استئصال العروات، ولكن طالما أنك استطعت الحصول على غالبية العروات، فسيكون الأمر جيداً.ويمكنكم أن تروا وجود قطعة كبيرة جيدة من أنسجة R. وهنا توجد رُدَيْدَة (eyelet) جيدة مع رُدَيْدَة أخرى فوقها. ولكن، توجد بعض أنسجة R بينهما، حيث يمكنكم تحريك الأشياء نوعاً ما والتقاط الرُدَيْدَات الفردية.وإذا لاحظتم، فإنني أستخدم طرف ماصة غير مخروطي. يتميز هذا الطرف بجدار رقيق جداً وهو مستقيم، مما يسهل عملية دخول وخروج العروات من الطرف.توخَّ الحذر لكي لا تحاول التقاط عقدة لمفاوية. هذه عقد لمفاوية متخصصة وهي عقد لمفاوية بنكرياسية يتم استئصالها وتنقيتها. أحاول فقط التقاط الجزر إذا استطعت وأترك العقد اللمفاوية.بمجرد أن أنتهي من اختيار الحلقات العينية يدويًا، سأحصل على 500 حلقة عينية حرة في قاع أنبوب الطرد المركزي الدقيق هذا. والآن سأقوم بنقل هذه الحلقات العينية إلى أنبوب P 15 الخاص بنا لإجراء عملية الزرع. وطريقة القيام بذلك هي استخدام طرف ماصة لسحب الحلقات العينية ببطء من قاع الأنبوب.بمجرد وضع الحلقات في طرف الماصة، آخذ أنبوب السيليكون المتصل بأنبوب B 50، وأترك الكريات تستقر الآن في طرف الماصة عن طريق تثبيتها بشريط لاصق على جدار غطاء التدفق الصفحي. وبمجرد استقرار الكريات داخل طرف الماصة، نقوم بإزالة الماصة وندفع الكريات ببطء إلى داخل الأنبوب باستخدام القرص الدوار في الماصة، وليس المكبس. وأثناء تدوير قرص الماصة، أقوم بتحريك الأنبوب.تسمح هذه الخطوة للكريات بالدخول إلى أنبوب P 50. وعندما تحركت الكريات لتصبح على بُعد بوصة واحدة تقريباً من نهاية الأنبوب، قمت بطي الأنبوب للإبقاء على الكريات بداخله. ثم أزلت أنبوب السيليكون ونقلته إلى منطقة الطي.يتم وضع هذا بعد ذلك في أنبوب طرد مركزي باستخدام ماصة سعة 5 مل تم قصها. ثم أقوم بطي الأنبوب وتثبيته بشريط لاصق على الماصة سعة 5 مل. وهو الآن جاهز لعملية الطرد المركزي.تم حلق شعر الفأر وتخديره، وسنتأكد من عدم استجابته عند قرص إصبع القدم. سأقوم بتنظيف الفأر باستخدام مسحات اليود والبروبون. تُجرى الجراحة بطريقة معقمة، وجميع رؤوس أدواتي معقمة.سأقوم بإجراء شق صغير على الجانب الأيسر من الفأر، إلى اليمين مباشرة من الطحال. والهدف هنا هو إبقاء هذا الشق صغيراً بحيث يثبت الكلية في مكانها. وعند عزل الكلية، سيتم الآن القطع عبر جدار الصفاق فوق تلك الكلية مباشرةً، مع إجراء شق صغير.وبحركة واحدة، أرفع الجلد جهة اليسار وأدفع للأعلى، ثم أضغط للأسفل على الكلية لإخراجها بهذا الشكل. أحافظ على رطوبة الكلية باستخدام القليل من المحلول الملحي والجينتاميسين (Gentamycin)، وهو مضاد حيوي. وباستخدام إبرة قياس 25 gauge، سأقوم بعمل ثقب صغير في الكلية في الموضع الذي سيتم فيه وضع الأنابيب.لا ترغب في إحداث جرح غائر في الكلية، بل تريد فقط عمل شق صغير. سترى خطاً رفيعاً من الدم، وعندها ستعرف أنك قد اخترقت المحفظة.باستخدام أنبوب P 50 الذي تم قطعه بزاوية مائلة، سأقوم بالتموضع أسفل حافة القطع التي أجريتها، ثم أضع الأنبوب ببطء أسفل الكبسولة. يحافظ بافيل على رطوبة الكلية خلال هذا الإجراء لأن الكبسولة الجافة ستتمزق بسهولة. وبمجرد وصول أنبوب P 50 أسفل الكبسولة، سيقوم بافو بدفع الكريّة باستخدام سرنجة هاميلتون ذات المحرك اللولبي.ويمكنكم رؤية الكريّة وهي تدخل هنا ببطء. وتقومون بتوجيه توصيل العروات بناءً على مِحرك اللولب. وبمجرد توصيل العروات، آخذ طرف شاشة جافة، وأجفف المنطقة، وباستخدام جهاز الكي الكهربائي، أقوم بسد الشق والكلية.باستخدام خيط حريري مقاس 5-0، أمسكت بالبريتون وقمت بخياطته. أجري غرزة مستمرة لإغلاق بطن الفأر. ثم نقوم بإغلاق الجلد باستخدام دبابيس الجلد الجراحية.قبل إيقاظ الفأر، أحقنه حقناً تحت الجلد بمضادات الالتهاب bpro و amine و flu nixon ومسكن للألم. ثم يُعاد الفأر إلى قفصه على وسادة تدفئة. وبذلك أكون قد أوضحت لكم كيفية زراعة جزر لانجرهانز تحت محفظة الكلية في الفئران.يُعد هذا نموذجاً ممتازاً لدراسة التحمل المناعي لعمليات الزرع أو طرق علاج مرض السكري. وبشكل محدد في مختبرنا، نستخدم هذا النموذج لبحث تأثيرات الخلايا التائية المنظمة (tregs) على زراعة خلايا جزر البنكرياس أو تحفيز التحمل المناعي باستخدام جزيئات مختلفة من مثبطات التحفيز المشترك.

transplantation-pancreatic-islets-into-kidney-capsule-diabetic

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

وقد اقترح زرع الجزر المعزولة لتكون المعاملة المحتملة للاصابة بداء السكري من النوع 1. نحن هنا وصف الأسلوب لعزل الجزر من بنكرياسات الماوس وزرع لهم في الفضاء تحت المحفظة في الكلى.

وهناك طريقة لعزل جزيرة الفئران تحت المحفظة وزراعة الكلى

يصف هذا الفيديو بروتوكول تطعيم جزر البنكرياس البشرية في الغرفة الأمامية لعين الفأر لمراقبة إعادة توعية الطعوم الجزرية البشرية في الجسم الحي. كما أنه يساعد على فهم مساهمة الخلايا المتلقية مقابل الخلايا المانحة في تعزيز تغليف والأوعية الدموية للطعم.

تطعيم جزر البنكرياس: طريقة لزرع جزر البنكرياس في الغرفة الأمامية لعين الفأر للتصوير في الجسم الحي

هذا البروتوكول يوضح الفئران العزلة جزيرة والبذر على سقالة ديسيلولاريزد. تم زرع الجزر التي تدعم سقالة في لوحة الدهون البربخ من ستريبتوزوتوسين (ستز) التي يسببها الفئران السكري. نجت الجزر في موقع الزرع وعكست حالة فرط سكر الدم.

تدعمه سقالة زرع الجزر في سادة الدهون البربخ من الفئران السكري

بين زرع الأعضاء الصلبة البطن، الطعوم البنكرياس هم عرضه لتطوير الأضرار الفساد المرتبطة بالإصابة ضخه الاسكيمية شديدة، مما يؤدي في نهاية المطاف إلى فقدان الفساد المبكر. ويصف هذا البروتوكول نموذج لزرع بنكرياس موريني باستخدام تقنية غير خياطة الكفة، مناسبة بشكل مثالي لتحليل هذه الأضرار المبكرة، والضارة بالصحة.

نموذج الماوس لزرع البنكرياس باستخدام تقنية تعديل الكفة

يتم عرض طريقة لزرع أومينتال من الجزر الصغيرة في ماوس. الجزر الصغيرة المعزولة مختلطة مع المائية ويوضع الخليط داخل الحقيبة أومينتال بالماوس السكري. ثم يتم رصد الجلوكوز في الدم، وإجراء التحليل المناعية histochemical.

طريقة لزرع جزيرة ليلى إلى الثرب في الماوس

زرع البنكرياس جزيرة ليلى وسيلة لتحقيق نورموجليسيميا في مرض السكري من النوع 1. تركز هذه المقالة على تقنية زرع الأعضاء من خلال توجيه إينترابورتال للحفاظ على مستويات السكر العادي في الفئران السكري.

إينترابورتال زرع جزيرات البنكرياس في طراز الماوس

في هذا البروتوكول ، يتم وصف طريقة عزل الجزر التورانية وزرعها في الأنسجة الدهنية البيضاء تحت الجلد الجلدية. يتم زرع الجزر التورينية المعزولة في متلقي المورين باستخدام هيدروجيل غشاء الطابق السفلي. يتم مراقبة مستوى السكر في الدم من المتلقين، ويتم إجراء تحليل الأنسجة من الطعوم السبوة.

الاعلية الجلدية الجلدية الأنسجة الدهنية البيضاء (ISWAT) نموذج زرع الجزر المورين

والهدف من هذا البروتوكول هو رصد مستمر لديناميات عملية صيد الجزر البنكرياسية البشرية والبلدان المضيفة المساهمة مقابل الخلايا المانحة. ويتم ذلك عن طريق زرع الجزر البشرية في الغرفة الأمامية للعين (ACE) من NOD. (Cg)-Gt(ROSA)26Sortm4-Rag2-/-المتلقي الماوس تليها تكرار 2-فوتون التصوير.

الطولية في التصوير فيفو و الكم من تطعيم جزيرة البنكرياس الإنسان والخلايا المضيفة المساهمة في غرفة العين الأمامية

نقدم هنا إجراءات جراحية محسنة حول إجراء عملية زرع الجزر داخل البوابة بنجاح ، وهو إجراء جراحي ذي صلة سريريا ولكنه صعب تقنيا ، في الفئران.

تقليل نزيف الوريد البابي بعد التسريب أثناء زراعة الجزر داخل الكبد في الفئران

نوفر بروتوكولا طفيف التوغل لزراعة العضلات لجزر الخلايا الجذعية المشتقة من خلايا البنكرياس البشرية إلى فئران تعاني من نقص المناعة لزرع الزراعة في الجسم الحي ، والتحليل اللاحق.

زراعة الخلايا الغدية الصماء المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات البشرية عبر العضلات في الفئران

تعلم تقنية زرع جزر البنكرياس تحت الكبسولة الكلوية للفئران السكرية. تقلل هذه الطريقة الإجهاد على الخلايا والفئران المستقبلة وتُحسّن نتائج الزرع في نماذج السكري.

زرع البنكرياس من الجزر في الكبسولة الكلى من الفئران من السكري

استكشف المزيد من الفيديوهات