زرع البنكرياس من الجزر في الكبسولة الكلى من الفئران من السكري

مرحبا ، اسمي جريج زود. أنا في مركز السكري بجامعة كاليفورنيا في سان فرانسيسكو في مختبر بلوستون ، واليوم سأوضح لكم كيفية زرع ثقوب عاكسة تحت كبسولة الكلى للفئران المصابة بالسكري. يتضمن هذا الإجراء أخذ الثقوب التي تم تنقيتها من سلالة الفئران الزاوية أو الخيفية ، وأخذ تلك الثقوب ، وتنقيتها ، وزرعها تحت كبسولة الكلى للفئران المصابة بالسكري.

الفئران التي يمكن أن تكون مصابة بالسكري بشكل طبيعي مثل NOD أو الفئران التي تصنع السكري بشكل مصطنع مع حقن البكتيريا العقدية بيتوسين. نحن الآن على استعداد لاختيار الثقوب يدويا. سأقوم باختيار الثقوب يدويا وعدها أثناء امتصاصها بمرعى بماصة.

سأترك ورائي أي A في أنسجتنا ، ويمكنكم أن تروا فقط من خلال الطريقة التي تنكسر بها الأضواء في الأنسجة ، ما هي الثقب وما هو ليس الثقب. ثم أحسب الثقوب. سأضعها في أنبوب مركزي صغير ، وسنقوم بجمعها للزراعة.

تتمتع الثقوب بمظهر أكثر كثافة ومحمرة تقريبا ، والآس في R أخف وزنا وأكثر رقة. كما أن لها نظرة بيضاء. لذلك ، ستحصل على بعض الأنسجة في R أثناء عمل الثقوب ، ولكن طالما أنك تمسك بغالبية الثقوب ، فستكون بخير.

ويمكنكم أن تروا أن هناك قطعة كبيرة لطيفة من الأنسجة R في الأنسجة R. ثم ها هي ثقب جميل مع ثقب آخر فوقه. وبعد ذلك ، ولكن هناك بعض الآس في r بينهما يمكنك تحريك الأشياء والتقاط الثقوب الفردية.

وإذا لاحظت ، فأنا أستخدم طرف ماصة غير مخروطي. هذا الطرف رقيق جدا ومستقيم. هذا يسمح بسهولة أكبر للثقوب للدخول والخروج من الحافة.

احرص على عدم محاولة الإمساك بالعقدة الليمفاوية. هذه هي الغدد الليمفاوية الباطنية وهي الغدد الليمفاوية البنكرياسية التي يتم هضمها وتنقيتها. أحاول فقط الإمساك بالثقوب إذا استطعت وترك الغدد الليمفاوية وراءي.

بمجرد أن أختار الثقوب يدويا ، لدي 500 ثقوب حرة في الجزء السفلي من أنبوب الطرد المركزي الصغير هذا. الآن سأقوم بنقل هذه الثقوب إلى أنبوب P one 50 للزراعة. وكيف أفعل ذلك هو أنني آخذ طرف ماصة وأقوم بشفط الثقوب ببطء من قاع الأنبوب.

أنا ، بمجرد أن تكون الثقوب في طرف الماصة ، آخذ أنبوب السيليكون المتصل بأنبوب B 50 ، وسأتركها تستقر الآن في طرف الماصة عن طريق لصقها على جانب جدار الغطاء. بمجرد أن تستقر الكريات داخل طرف الماصة ، سنقوم بإزالة الماصة ودفع الحبيبات ببطء إلى الأنبوب باستخدام القرص الموجود على الماصة ، وليس المكبس. وبينما أطلب الماصة ، أقوم بتحريك الأنبوب.

إنها تسمح للكريات بدخول أنبوب P 50. عندما انتقلت الكريات إلى حوالي بوصة واحدة من نهاية الأنبوب ، قمت بثني الأنبوب لإبقاء الكريات هناك. أزلت أنبوب السيليكون ونقلت إلى شبك.

ثم يتم وضعها في أنبوب طرد مركزي بماصة من خمس مطاحن تم قطعها. ثم أقوم بطي الأنبوب وتثبيته على الماصة ذات الخمسة مطحنة. والآن أصبح جاهزا للتحصيل المركزي.

تم حلق الفأر وتخديره، وسنتحقق للتأكد من أنه لا يستجيب لقرص إصبع القدم. وسأقوم بتنظيف الفأر بمسحات اليود من البروبون. تتم الجراحة بشكل معقم ، لكن جميع أطراف أدواتي معقمة.

على يمين الطحال على الجانب الأيسر من الفأر ، سأقوم بعمل شق صغير. الآن الفكرة هي إبقاء هذا الشق صغيرا بحيث يحمل الكلى لأعلى. عندما تعزل الكلى ، فإنها ستقطع الآن جدار الصفاق فوق تلك الكلية مباشرة ، مما يؤدي إلى عمل شق صغير.

وبحركة واحدة ، أرفع الجلد إلى اليسار وأدفع لأعلى ، وأضغط على الكلية وأخرجها بهذه الطريقة تماما. أحافظ على رطوبة الكلى ، وقليل من المحلول الملحي والجنتاميسين مضاد حيوي. باستخدام إبرة قياس 25 ، سأقوم بعمل شق صغير في الكلى للمكان الذي سيتم فيه وضع أنبوبي.

أنت لا تريد أن تحفر الكلى ، فأنت تريد فقط أن تصنع شقة صغيرة. سترى خطا صغيرا من الدم. ثم أنت تعلم أنك في الكبسولة.

بأخذ أنبوب P 50 الخاص بي الذي تم قطعه على شطبة ، سألتقط أسفل شفة هذا القطع الذي قمت به وأضع الأنبوب ببطء تحت الكبسولة. يحافظ بافيل على رطوبة الكلى أثناء هذا الإجراء لأن الكبسولة الجافة سوف تتمزق بسهولة. بمجرد أن يكون أنبوب P 50 أسفل الكبسولة ، سيقوم Pavo بدفع الحبيبات باستخدام حقنة هاميلتون مع محرك المسمار.

ويمكنك أن ترى الحبيبات تسير ببطء هنا ببطء. وتقوم بتوجيه تسليم العيينة بناء على محرك المسمار. بمجرد تسليم الثقوب ، آخذ طرفا من الشاش الجاف ، وأمسح المنطقة ، وباستخدام مكواة الكي ، أغلق الشق والكلى.

باستخدام خمسة حرير ، أمسكت بالصفاق وخياطته. أقوم بعمل غرزة تشغيل لإغلاق الماوس. أنا ، نغلق الجلد بدبابيس الجلد.

قبل أن أوقظ الفأر ، أعطيه حقنة تحت الجلد من مضادات الالتهابات bpro و amine و flu nixon ومسكن للألم. ثم يتم إرجاع الفأر إلى قفصه على وسادة تدفئة. لذلك أوضحت لك للتو كيفية زرع الثقوب تحت كبسولة الكلى للفئران.

هذا نموذج رائع للنظر في تحمل الزرع أو طرق علاج مرض السكري. على وجه التحديد في مختبرنا ، نستخدم هذا النموذج للنظر في تأثيرات Tregs على زرع خلايا العيينة أو تحفيز التسامح مع جزيئات الحصار التكميلية المختلفة.