باستخدام الماوس BLT إنساني وساق الموديل خلية مقرها جين ورم العلاج

الهدف العام من التجربة التالية هو توليد فئران تحمل جهاز مناعة بشري هندسيا. يتم تحقيق ذلك عن طريق تحضير الفأر أولا للجراحة ثم تحميل المبزل بقطعة من الغدة الصعترية في الخطوة الثانية. يتم خلط Matrigel مع الخلايا المنقولة CD 34 السلبية و CD 34 الموجبة ، ثم يضاف الخليط إلى المبزل.

بعد ذلك ، يتم زرع تركيبات matrigel تحت كبسولة الكلى. في النهاية ، يمكن مراقبة رفض الأورام المستهدفة بواسطة خلايا CD الثماني المعدلة وراثيا عن طريق التصوير الحي للحيوانات الأليفة وقياسات الورم الفيزيائية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على طرق الميثامفيتامين الحالية مثل نماذج الخلايا العصبية بالكامل ، هي أن هذه الطريقة تسمح بدراسة تطور الخلايا الجذعية البشرية المعدلة وراثيا داخل الغدة الصعترية البشرية واختبار الفعالية اللاحق في الجسم الحي للسلالات المشتقة التي توضح أن الإجراء سيكون ثلاثة فنيين من مختبراتنا ، جريجوري بريستول ، برنارد ليفين ، وشون كيم.

في هذا الرسم التخطيطي ، تم تحديد نموذج BLT المعدل المستخدم في هذه الدراسات لتوليد الفئران الخيمرية التي تحمل مارت ، وهي خلية تائية محددة. يتم إعادة بناء الغرسة من خلايا CD 34 المحولة وغير المنقولة المعزولة من كبد الجنين الذاتي. ثم يتم تجميد جزء من الخلايا المنقولة وحقنها في الفئران المشععة بعد أربعة إلى ستة أسابيع.

في هذا الفيديو ، يتم عرض زرع البناء الحي بمجرد أن تصبح بطيئة من التخدير. ابدأ بحلق الجانب الأيسر من كل فأر من الورك إلى الكتف بين مركز الظهر والبطن. بعد تسجيل وزن كل ، قم بضرب آذانهم للترقيم وتحت الجلد ، حقن 0.3 مل من الكاربروفين في كل كتفين.

ثم ضع الفئران على جانبيها الأيمن في مواجهة اليسار. الآن اغسل مبزل إبرة زرع السرطان عيار 16 بطرف ملف دائري مع PBS. باستخدام زوج من ملقط الأنف بالإبرة ، أضف قطعة من الغدة الصعترية إلى طبق PBS ثم أمسك المبزل أفقيا بالقضيب.

فقط داخل الطرف شفط الأنسجة. يعد انزلاق المبزل تحت كبسولة الكلى وحقن الأنسجة أحد أكثر الجوانب تحديا في هذا الإجراء. بعد ذلك ، احصل على مساعد.

استخدم ماصة الإزاحة الموجبة eend orph لخلط خمسة ميكرولترات من matrigel البارد في أنبوب واحد من الخلايا مع التحريك اللطيف. الحفاظ على المبزل أفقيا. اسحب القضيب ببطء بينما تقوم الماصات المساعدة بطلاء ماتري.

تخلط في المبزل لكل فأر. أولا ، امسح الجلد العاري للحيوان باستخدام البيتادين ثم امسحه بمنديل الأيزوبروبانول. مرتين تحديد أغمق بقعة تحت الجلد ، مما يشير إلى موقع الطحال.

تم العثور على الكلية على بعد حوالي خمسة ملليمترات من ظهر الطحال باستخدام ملقط حاد لالتقاط الجلد فوق الكلى. قم بعمل قطع بطول حوالي 15 ملم في الجلد الموازي للطحال. قم بعمل قطع مماثل في طبقة عضلات الصفاق أدناه.

في الذكور ، يجب أن تكون الكلية مرئية بشكل مباشر. ما عليك سوى الضغط على البطن لإخراجه. الحفاظ على الضغط على البطن باليد اليسرى للحفاظ على الكلية مكشوفة عند الإناث ، استخدم أولا الإرقاء لالتقاط المبيض ثم سحب الكلية للمساعدة في الاحتفاظ بالعضو خارج الجسم.

نتف ثقبا صغيرا في الطرف الخلفي من كبسولة الكلى ثم حرك المبزل في هذه الفتحة وعلى طول الكلى حتى يتم تغطية فتحة المبزل بالكامل بواسطة كبسولة الكلى. ثم باستخدام الإصبع الصغير لليد اليمنى ، قم بحقن الأنسجة. استخدم الآن الإرقاء المغلق لدفع الكلية برفق إلى مكانها.

اربط غرزة واحدة في الصفاق بقوس مزدوج ، واضغط على الجلد لأعلى مثل المحفظة ، ثم ضعه في مقطعين للجرح. أخيرا ، ضع قطرة من PBS على كل عين وضع الفأر على جانبه في قفص فوق بعض الفراش. بعد زرع جميع الفئران بنفس الطريقة ، تأكد من أن قد عادت إلى الاستلقاء على بطونها قبل مغادرتها.

يظهر هذا الشكل الأول صورة تمثيلية للغرسة الحية THI في الفئران المتوافقة مع البشر. في هذا الشكل ، يظهر التطور الطبيعي للأنسجة الصعترية وتوزيع الأنسجة الفسيولوجية للقرص المضغوط البشري الرابع والقرص المضغوط الثامن T الإيجابي. بعد إعادة التكوين ، تحمل جهاز مناعة بشري مع توزيع طبيعي لخلايا CD أربعة و CD ثمانية خلايا تائية موجبة.

هنا تظهر صورة تمثيلية لفأر يحمل ورم الميلانين. تشير المناطق الرمادية إلى صورة التصوير المقطعي المحوسب. تشير المناطق الملونة إلى النشاط الأيضي للورم كما تم اكتشافه بواسطة فحص التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني.

أشار التصوير المقطعي المحوسب وحده في هذه التجربة إلى وجود كتلة ورم كبيرة في المنطقة المشار إليها بالدائرة البيضاء. ومع ذلك ، كما يوضح التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني في الجسم الحي ، تتكون هذه المنطقة في الغالب من أنسجة نخرية وندبة ، مما يؤكد فائدة التصوير المقطعي بالإصدار البوزيتروني كطريقة أكثر حساسية ودقة لتقييم انحدار الورم وإزالته. باتباع هذا الإجراء ، يمكن إجراء فحوصات أخرى مثل الخلية التائية والتنميط الظاهري والتنشيط خارج الجسم الحي للإجابة على الأسئلة ذات الصلة بوظيفة الخلية التائية.