الاستفادة من وجود نافذة القحف لتصور الشريان الدماغي الأوسط خلال Endothelin-1 انسداد الشريان الدماغي الأوسط المستحثة

في بروتوكول الفيديو هذا ، سنوضح استخدام نافذة الجمجمة لتصور الشريان الدماغي الأوسط أثناء انسداد الشريان الدماغي الأوسط الناجم عن البطانة. لإعداد نافذة الجمجمة هذه ، يتم إجراء استئصال التدوين الصدغي من أجل عرض الأجزاء القريبة من الشريان الدماغي الأوسط. إنشاء نافذة الجمجمة هي طريقة تسمح بالتصور المباشر للهياكل الموجودة على السطح القشري للدماغ.

يمكن إجراء هذه التقنية في العديد من المواقع التي تغطي مخيخ الفئران ، ولكن يتم تنفيذها بسهولة عن طريق استئصال Ccraniectomy فوق العظام الأمامية أو الجدارية التي يمكن الوصول إليها بسهولة. في أغلب الأحيان ، استخدمنا هذه التقنية مع انسداد الشريان الدماغي الأوسط الناجم عن البطانة أو ET ، وهو نموذج MCAO المستحث للسكتة الدماغية الإقفارية. يتم إجراء إجراء نافذة الجمجمة لتحديد التغيرات في قطر الوعاء الدموي التي تحدث بعد حقن ET واحد في حمة الدماغ المجاورة للشريان الدماغي الأوسط القريب أو MCA.

على وجه التحديد ، نستخدم تقنية لإنشاء نافذة قمجمة من خلال العظم الصدغي على الجانب الجانبي من جمجمة الفئران. يمكن بعد ذلك تصور الشرايين الدماغية إما مع الجافية سليمة أو مع الجافية المكونة وسحبها. الأكثر شيوعا ، نترك الجافية سليمة أثناء التصور.

نظرا لأن ET واحد MCAO المستحث يتضمن توصيل ببتيد ضيق للأوعية إلى حمة الدماغ ، فإن هذا يتجاوز الحاجة إلى شق الجافية مباشرة فوق الأوعية المرئية لتوصيل الدواء. في هذا الفيديو ، سنوضح كيفية إنشاء نافذة قمجمة لتصور الشرايين الدماغية بطريقة تدريجية ، وكذلك كيفية تجنب العديد من المزالق المحتملة الشائعة المتعلقة بهذه الطريقة. بعد وضع قنية التوجيه ، كما هو مشار إليه ، يمكن إنشاء نافذة قحفية لتصور الأجزاء القريبة من الشريان الدماغي الأوسط مباشرة أثناء إجراء السكتة الدماغية ، أولا ، قم بعمل شق في فروة الرأس كما هو موضح باستخدام المقص وسحب الجلد للكشف عن العضلة الصدغية.

قم بتقسيم العضلة الصدغية باستخدام الكي الكهربائي ، ثم تراجع لتصور الجزء الحرشفية من العظم الصدغي. يعد الحصول على التعرض الكافي للعظم الصدغي أمرا بالغ الأهمية لهذا الإجراء. احرص على تجنب المدار أثناء الكي.

لتحسين التصور ، استخدم الخياطة لسحب العضلة الصدغية المنقسمة. ارسم مربعا من ثلاثة إلى أربعة ملليمترات على الجزء الحرشفية من تدلل العظم الصدغي إلى المدار ومتفوقا على قاعدة العملية الوجني لأنها تنعكس خارج العظم الصدغي. استخدم مثقاب لقطع هذا الجزء من العظام.

احرص على تجنب الضغط الشديد لأنه من الممكن الحفر في الدماغ. تأكد من إجراء عمليات شطف متكررة بمحلول ملحي معقم لتحسين رؤية المجال الجراحي ومنع ارتفاع درجة حرارة الجمجمة. بدءا من زاوية فضفاضة ، قم بإزالة قطعة العظم الصدغي بعناية باستخدام ملقط أسنان الفئران الدقيقة ، مع التأكد من عدم تمزيق أي أوعية مرتبطة بالجافية.

هنا يمكنك تصور فرع من الشريان الدماغي الأوسط عند خط الأساس قبل حقن البطانة. واحد. في غضون دقائق من حقن البطاني ، سيبدأ الشريان الدماغي الأوسط في الانقباض. في النهاية ، يصبح من الصعب تصور الفروع وستصبح أنسجة المخ شاحبة.

بعد حوالي 20 دقيقة ، سوف تتضاءل تأثيرات البطانة وستبدأ الأوعية في التمدد تدريجيا. العودة إلى قطر خط الأساس بعد حوالي 45 دقيقة لقياس قطر الوعاء في نقاط زمنية مختلفة قبل وبعد حقن البطاني ، يتم التقاط إطارات ثابتة من الفيديو على فترات دقيقة واحدة. باستخدام مشغل وسائط VLC باستخدام مشغل وسائط VLC ، انتقل إلى الأدوات والتفضيلات ، ثم قم بتغيير الإعداد إلى الكل ضمن إعدادات العرض.

قم بتوسيع قائمة الفيديو في الشريط الجانبي الأيسر وقم بتوسيع وحدات الإخراج. حدد مشهد نوع عامل تصفية المشهد لبادئة اسم الملف. ثم أضف مسار دليل.

بعد ذلك ، قم بتعيين نسبة التسجيل لالتقاط الإطارات الثابتة بناء على معدل إطارات الفيديو الخاص بك كما هو موضح في البروتوكول المكتوب. أخيرا ، انقر فوق حفظ فتح. سيقوم الفيديو المطلوب ومشغل VLC تلقائيا بحفظ الإطارات الثابتة مرة كل دقيقة لقياس قطر السفينة.

باستخدام هذه الصور أولا ، افتح برنامج Image J ، ثم افتح الإطارات الثابتة التي ستقيسها. انتقل إلى التحليل وتعيين القياسات وإلغاء تحديد جميع المربعات. حدد أداة الخط المستقيم ، وقم بالتكبير كما هو مطلوب.

ضع خطا عموديا على مسار الوعاء لقياس قطر الوعاء. انتقل إلى التحليل ، ثم انقر فوق القياس للحصول على قطر الوعاء. كرر هذا لجميع الصور المطلوبة.

يجب تطبيع قطر الوعاء في كل نقطة زمنية إلى قطر الوعاء الأساسي بحيث يمكن إجراء مقارنات باستخدام فئران متعددة. للقيام بذلك ، استخدم الصيغة الموضحة هنا. باختصار ، تقنية تحضير نافذة الجمجمة هذه متعددة الاستخدامات للغاية حيث يمكن تغييرها لتلبية احتياجات العديد من التجارب مع تعديلات طفيفة.

على سبيل المثال ، نجحنا في مراقبة تدفق الدم الدماغي في فروع MCA محددة باستخدام صور تدفق دوبلر بالليزر للتركيز مباشرة على الشريان الدماغي الذي يتم تصوره من خلال نافذة الجمجمة. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن استخدام مستحضر مماثل مع حجم الجافية مع الإدارة الموضعية للمركبات النشطة للأوعية الدموية لإنشاء حمام تفاعلي الأوعية الدموية في الجسم الحي. يجب مراعاة عدة عوامل عند إعداد نافذة الجمجمة من أجل تقليل معدل الفشل لهذه التقنية.

ترتبط العديد من هذه العوامل بالحصول على تصور جيد للشرايين الدماغية. على سبيل المثال ، يجب توخي الحذر عند إجراء استئصال Ccraniectomy حتى لا تتعطل الجافية أو الأوعية الدموية التي تعلوها مع سرير الحفر. يتم تحقيق ذلك بشكل أفضل من خلال الغسالات المتكررة بمحلول ملحي معقم لإزالة الحطام وتبريد الجمجمة.

نأمل أن يساعدك هذا الفيديو في تصميم التجارب التي تستخدم نافذة الجمجمة وتساعدك على تجنب المزالق الشائعة التي يمكن أن تحدث أثناء هذا الإجراء.