Quantitative Analysis of Autophagy using Advanced 3D Fluorescence Microscopy

Chun A. Changou; Deanna L. Wolfson; Balpreet Singh Ahluwalia; Richard J. Bold; Hsing-Jien Kung; Frank Y.S. Chuang

doi:10.3791/50047

التحليل الكمي الالتهام الذاتي باستخدام المجهر مضان المتقدم 3D

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Quantitative Analysis of Autophagy using Advanced 3D Fluorescence Microscopy

التحليل الكمي الالتهام الذاتي باستخدام المجهر مضان المتقدم 3D

Full Text

18,505 Views

09:59 min

May 3, 2013

DOI: 10.3791/50047-v

Chun A. Changou^1,2, Deanna L. Wolfson², Balpreet Singh Ahluwalia^2,3, Richard J. Bold^4,5, Hsing-Jien Kung^5,6, Frank Y.S. Chuang^1,2,5

¹Department of Biochemistry and Molecular Medicine,University of California, Davis , ²NSF Center for Biophotonics Science & Technology,University of California, Davis , ³University of Tromsø, ⁴Department of Surgery (Division of Surgical Oncology),University of California, Davis , ⁵UC Davis Comprehensive Cancer Center,University of California, Davis , ⁶Department of Biological Chemistry,University of California, Davis

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

الالتهام الذاتي هو عملية في كل مكان التي تمكن الخلايا تتحلل وإعادة تدوير البروتينات والعضيات. نحن نطبق المجهري مضان متقدمة لتصور وقياس صغيرة، ولكن التغييرات الأساسية، المادية المرتبطة تحريض الالتهام الذاتي، بما في ذلك تشكيل وتوزيع autophagosomes والجسيمات الحالة، والانصهار بهم إلى autolysosomes.

الهدف العام من هذا الإجراء هو الحصول على صور كمية لخلايا ورم البروستاتا المعالجة لقياس درجة ومدى الالتهام الذاتي في نقاط زمنية مختلفة. يتم تحقيق ذلك عن طريق معالجة الخلايا أولا بالأرجينين أو الداز أو الكواشف التجريبية الأخرى للحث على الالتهام الذاتي و / أو موت الخلايا. الخطوة الثانية هي تحديد ما إذا كنت تريد تصوير الخلايا الحية أو الخلايا الثابتة وإعداد العينات وفقا لذلك.

بعد ذلك ، احصل على صور مضان ثلاثية الأبعاد للخلايا الحية أو الثابتة باستخدام الفحص المجهري الفلوري للإضاءة العريضة أو التلاف أو الإضاءة المنظمة. تتمثل الخطوة الأخيرة في جمع البيانات الإحصائية حول توزيع حجم البلعمة الذاتية وتحديد الموقع مع الهياكل الأخرى داخل الخلايا. باستخدام برنامج تحليل الصور الرقمية ثلاثية الأبعاد ، يمكن لهذا النهج الحصول على نتائج لا تظهر فقط أن تحريض العاثية الذاتية بواسطة الأرجينين يمكن أن يتسبب في موت الخلايا السرطانية في البروستاتا ، ولكن أيضا أن هذه الخلايا تظهر تغيرات هيكلية تختلف شكليا عن التغيرات المرتبطة بموت الخلايا المبرمج والنخر.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos