التجريبية النقل المكورات الرئوية الإنسان

الهدف من هذا الإجراء هو إنشاء نقل تجريبي للمكورات الرئوية البشرية. يتم تحقيق ذلك عن طريق تخفيف البكتيريا الموجودة في اللقاح وقياسها أولا. في الخطوة الثانية ، يتم تلقيح المتطوع عن طريق الأنف بالمكورات العقدية الرئوية.

بعد ذلك ، يخضع المتطوع لغسل الأنف في الأيام الثاني والسابع والرابع عشر بعد التلقيح. أخيرا ، يتم استخدام علم الأحياء الدقيقة الكلاسيكي لتحديد ما إذا كان المتطوع يحمل المغطى الملقح. في النهاية ، يمكن الحصول على عربة المكورات الرئوية البشرية التجريبية باستخدام هذه الطريقة الآمنة والقابلة للتكرار.

الميزة الرئيسية من هذا تقنية على موجودة الفئران عربة نماذج أن هذا تقنية يقدم نموذج النقل في المضيف طبيعية من المكورات الرئوية الإنسان. علاوة على ذلك ، يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال المكورات الرئوية ، مثل ما هي الارتباطات المناعية للحماية؟ ما هو تأثير التحصين للنقل ، وما هو تأثير ضغط المضيف على العامل الممرض في مكانة البلعوم الأنفي؟

تشمل تطبيقات هذه التقنية استخدامها كطريقة لاختيار لقاحات المكورات الرئوية الجديدة. نخطط لاستخدام الوقاية من النقل كبديل للمناعة التي يسببها اللقاح. ستظهر التقنية السريرية الأخت أنجي رايت والممرضة المسؤولة ديفيد شو.

قبل 30 دقيقة من موعد التطعيم المحدد للمتطوعين ، يتم أخذ أنبوب مخزون اللقاح من الفريزر 80 درجة مئوية تحت الصفر. ثم قم بتدوير اللقاح في جهاز طرد مركزي دقيق لمدة ثلاث دقائق عند 17،000 مرة. G ، أثناء دوران الأنبوب ، قم بتسخين بعض ألواح أجار الدم في حاضنة 37 درجة مئوية.

ثم قم بإزالة المرق من لقاح جهاز الطرد المركزي ، واغسل الحبيبات في مليلتر واحد من المحلول الملحي. كرر خطوة الطرد المركزي والغسيل. قم بإجراء مجموعة تخفيف لتركيز اللقاح المطلوب ، ثم حدد كمية البكتيريا في اللقاح بميل وطريقة تشبه المسراء.

ستصبح المستعمرات المزروعة مرئية في اليوم التالي. خذ اللقاح إلى المتطوع الذي يجب أن يجلس بشكل مريح في وضع شبه راقد ثم باستخدام P 200 perpe ونصائح مرشح معقمة.

اسحب 100 ميكرولتر من اللقاح في طرف البربي ، وأدخل الطرف داخل تجويف الأنف مباشرة. طرد اللقاح ببطء على الغشاء المخاطي للأنف باستخدام حركة دائرية. لا تضع طرف الماصة بعيدا جدا للخلف ، وإلا فسوف يسري اللقاح في الحلق.

كرر التلقيح للناريس الآخر لتجنب دخول البكتيريا إلى مجرى الدم. احرص على عدم تعطيل الغشاء المخاطي باستخدام الماصة. ثم اجعل المتطوع يظل في وضع شبه راقد لمدة 10 دقائق للسماح للبكتيريا بالتشتت عبر الغشاء المخاطي.

بعد إعطاء اللقاح للمتطوعين ، كرر القياس الكمي البكتيري في المختبر. ثم قم بتسمية الأنبوب بالتاريخ وجرعة اللقاح ، وقم بتخزين اللقاح عند 80 درجة مئوية تحت الصفر. قبل البدء في غسل الأنف ، اطلب من المتطوع الجلوس بشكل مريح مع إمالة الرأس للخلف 30 درجة من الوضع الرأسي.

ثم اطلب من المتطوع أن يأخذ نفسا عميقا ويحبس نفسا عميقا بينما يدفع اللسان لأعلى وللخلف مقابل سقف الفم. اطلب من المتطوع الإشارة عند تحقيق هذا المنصب. الآن اغسل تجويف الأنف أربع مرات ب 20 مل من المحلول الملحي ، وقم بتفريغ خمسة ملليلتر من المحلول الملحي في المرة الواحدة في الفضاء الأنفي الأمامي.

اطلب من المتطوع أن يميل على الفور إلى الأمام ويزفر بسرعة من خلال الأنف في وعاء من رقائق الألومنيوم لطرد السائل بعد كل تدفق من محلول ملحي بخمسة ملليلتر. بعد غسل تجويف الأنف بأربعة 20 ملليلتر ، اسحب جميع العينات التي تم جمعها معا في أنبوب طرد مركزي. الآن قم بالطرد المركزي لعينات غسل الأنف المتطوعة لمدة 10 دقائق عند 3 ، 345 مرة G.قم بإزالة supinate وتخزينه على شكل مليلتر واحد في أنابيب einor المسماة عند 80 درجة مئوية تحت الصفر.

أضف 100 ميكرولتر من وسط STGG إلى الحبيبات واخلطها جيدا ، ثم حدد الحجم الكلي في الأنبوب. اللوحة التالية ، قطرة 20 ميكرولتر من الحبيبات المعلقة على صفيحة أجار الدم تحتوي على الجنتاميسين وخط اللوحة بأكملها. إذا كان غسل الأنف بعد التلقيح ، فاستخدم 10 ميكرولتر من STGG التي تحتوي على الحبيبات المعلقة.

لقياس البكتيريا عن طريق الأميال وطريقة ميسرا ، أضف 800 ميكرولتر أخرى من STGG إلى أنبوب غسيل الأنف واخلطه جيدا. ثم ضع 25 ميكرولترا من محلول الخلايا البكتيرية STGG على طبق أجار دم آخر و 25 ميكرولترا على طبق أجار الشوكولاتة ، مع خطوط كلتا اللوحين بالكامل. ثم قم بتجميد البكتيريا المتبقية في قارورتين بالتبريد عند 80 درجة مئوية تحت الصفر.

احتضان الألواح التي تكون 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها في 5٪ ثاني أكسيد الكربون. في اليوم التالي ، افحص الصفائح بحثا عن المكورات الرئوية ومسببات الأمراض التنفسية المحتملة الأخرى. قد يكون من الصعب قراءة ألواح أجار الدم ، الملقحة بغسول الأنف.

تظهر هذه الصورة مثالا على لوحة يسهل قراءتها مع ظهور المكورات الرئوية بوضوح. ومع ذلك ، تحتوي هذه اللوحة على العديد من النباتات الاستعمارية المشتركة مما يجعل من الصعب تحديد ما إذا كانت المكورات الرئوية موجودة في كل موعد. طلب من المتطوعين وصف أي أعراض للجهاز التنفسي العلوي في حالة وجودها وتم تسليط الضوء على المقارنة بين الناقلين وغير الناقلين.

من بين 145 شخصا تم تطعيمهم مؤخرا بالمكورات الرئوية ، اشتكى 28 شخصا من الأعراض كما هو موضح في هذا الجدول. كان ثمانية من هؤلاء المتطوعين ناقلين ، و 20 لم يكونوا كذلك. تمت مراجعة جميع الشكاوى من قبل لجنة السلامة الخارجية وبعد إجراء تحقيقات كاملة.

لم تعزى أي أعراض إلى مرض المكورات الرئوية. كانت الأعراض الأكثر شيوعا هي التهاب الحلق وحشو الأنف ومرض يشبه الأنفلونزا. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن يكون لديك خطة أمان شاملة للغاية ، والتي تغطي كل خطوة من خطوات الطريقة ، خاصة من أجل سلامة المتطوعين.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إنشاء عربة تجريبية للمكورات الرئوية البشرية ، واكتشاف النقل باستخدام غسل الأنف.