Name: نموذج الفئران من التئام الجروح (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 39 s
Description: تعلم نموذج التئام الجروح في الفئران باستخدام جبيرة السيليكون لمنع الانكماش وتعزيز التسرّي الطلائي والتكاثر الخلوي والأوعية الدموية. يُمكّن هذا النموذج الباحثين من اختبار العلاجات بشكل قوي وموثوق.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

فإن الكتاب أود أن أنوه الدعم التمويلي من الوطني للصحة ومجلس البحوث الطبية (NHMRC) من استراليا (مشروع المنحة رقم: 632512). كان مدعوما من قبل لويز دن NHMRC المبكر الزمالة الوظيفي وكريستينا Bursill بواسطة شهادة زمالة مؤسسة القلب التنمية الوطنية.

1. إعداد والجبائر والضمادات الكاتمة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الخطوط العريضة 10 ملم على الدوائر 0.5 مم الأغطية سيليكون سميكة واستخدام مقص أو لكمة خزعة لإنشاء أقراص السيليكون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المركز 5 ملم خزعة لكمة في منتصف مم دائرة 10 واضغط بشدة إلى خلق ثقب لتشكيل &quot;دونات&quot; مثل القرص التي سيتم استخدامها بوصفها جبيرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الخطوط العريضة 10 مم الدوائر على تضميد الانسداد شفافة مثل Opsite ومقص استخدامها لإنشاء الضمادات دائرية. </li></ol> 2. حيوانات التجارب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على موافقة لجنة الأخلاقيات الحيوان لجميع التجارب التي سوف يتم تنفيذها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام 8 أسابيع من العمر (22-26 غرام) ذكر الفئران C57BL/6J من مربي التجارية (مثل مختبرات جاكسون). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على الفئران في ظروف قياسية من 21 درجة مئوية والموارد البشرية دورة ضوء الظلام 12 مع حرية الوصول إلى الغذاء والماء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> (اختياري): مرض السكري يمكن أن يتسبب في الفئران القديمة 6-7 الاسبوع الماضي من البلعة داخل الصفاق injeكشن من 165 ملغ / كغ بالستربتوزوتوسين (في المخزن سيترات، ودرجة الحموضة 4.5)، مع أكده العادية مراقبة نسبة الجلوكوز في الدم (AccuChek غلوكمتر) ارتفاع السكر في الدم. قد يكون الفئران من السكري بوال وهكذا قد تحتاج الفراش لتغييرها بشكل متكرر أكثر للقضاء على الرطوبة وينبغي رصد أوزانها عن كثب. </li></ol> 3. التخدير والتحضير المنطوق <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لحث على التخدير العام باستخدام 5٪ isoflurane والأكسجين في 100٪ (معدل التدفق 1 لتر / دقيقة) والحفاظ على التخدير باستخدام 1-3٪ isoflurane و. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضمان ردود الفعل دواسة عميقة من الفأرة يتم منعها ووضع الماوس في وضعية الانبطاح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد المنطقة المنطوق عن طريق إزالة الفراء مع كليبرز من قاعدة الرقبة إلى 3 سم مزيد من أسفل الظهر وبين لوحي الكتف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن تطبيق تطبيق ضوء كريم مزيل الشعر لمدة لا تزيد عن 2 دقيقة. مسحات الشاش الرطب يمكن استخدامها لضمان أن جميع كريم وتتم إزالة ما تبقى الفراء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح الجلد معمسحة الكحول وتطبيقين من 10٪ بوفيدون اليود (بيتادين) وثنى الماوس. </li></ol> 4. الختان والتجبير من الجرح <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تقديم تمثيل بياني للنموذج الفئران التئام الجروح في الشكل 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام معقم 4 ملم خزعة لكمة إلى الخطوط العريضة نمطين الدائرية لالجرح على جانبي خط الوسط الماوس، على مستوى الكتفين (انظر الشكلين 2A-2B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط مسنن لرفع الجلد في منتصف المخطط ومقص القزحية لإنشاء الجرح كامل سمك الذي يمتد من خلال الأنسجة تحت الجلد (أرقام 2C-2D)، بما في ذلك السبلة العضلية (2E الشكل)، واستئصال قطعة دائرية من الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر العملية الجرح على الجانب الآخر من خط الوسط (الشكل 2F). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة طبقة واقية من البلاستيك من كل جانب من جبيرة السيليكون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق cyanoacrylaالشركة المصرية للاتصالات لاصق (مثل سوبر الغراء أو الصمغ كريزي) إلى جانب واحد من جبيرة السيليكون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المركز جبيرة على الجرح (الشكل 2G) ومرساة للجبيرة مع توقف 6-0 خيوط النايلون لضمان تحديد المواقع (الشكل 2H). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تكرار عملية التجبير على الجرح أخرى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان ذلك مطلوبا في هذا الوقت نقطة، وتطبيق المجمع العلاجية لفحصها (ما يصل إلى 100 ​​ميكرولتر) إلى الجرح واحد (الشكل 2I)، والسيطرة على السيارة إلى أخرى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغطية الجرح بضمادة الانسداد شفافة (على سبيل المثال، OpSite) (الشكل 2J-2K). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم وضع مسطرة تحت الجبائر وصورة مجهرية تؤخذ (الشكل 2L). </li></ol> 6. إدارة ما بعد الجراحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويدير كاربروفين (5 ملغ / كلغ) مرة واحدة يوميا عن طريق الحقن تحت الجلد لتخفيف الألم بعد الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد أن يتم بشكل فردي في قفص الحيوانات جراحة والمحافظة على حرارة مATS حتى تعافى تماما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رصد الحيوانات مرتين يوميا لمدة مظاهر الألم وفقدان الوزن. لاحظنا لا يعرض السلوكية الإجمالي من ألم أو فقدان الوزن. </li></ol> 7. قياس الجرح والعلاج <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الجرح يمكن قياسها يوميا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لحث على التخدير العام باستخدام 5٪ isoflurane والغاز (معدل التدفق 1 لتر / دقيقة)، ومن ثم ضمان ردود الفعل الحسية العميقة من الفأرة يتم منعها باستخدام 1-3٪ isoflurane و. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بلطف قشر الظهر خلع الملابس الانسداد بالملقط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الفرجار الجراحية لقياس قطر الجرح. ونحن نأخذ ما معدله ثلاثة قياسات طول X، Y و Z محور (أرقام 2M-2O) وكذلك صورة مجهرية لتكون مرجعا في المستقبل (الشكل 2P). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختياري: في هذا الوقت يمكن تقييم هذا الحيوان لنضح الدم باستخدام الليزر دوبلر تصوير (الشكل 2Q). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن إعادة تطبيق المجمع العلاجية والسيطرة على السيارة يكون ادائهاميد عند هذه النقطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> A نظيفة شفافة خلع الملابس الانسداد ثم يتم إعادة تطبيقها والحيوانات أبقى دافئ حتى تعافى تماما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملاحظة: إذا لم يتم تأمينها بشكل صحيح الجبائر الجرح ستتعاقد بسهولة (الشكل 2R). </li></ol> 8. التحليل النسيجي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الفئران بعد 10 يوما مع جرعة زائدة من التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط وشفرة مشرط إزالة الغرز وقشر بعناية بعيدا جبيرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مقص القزحية لخلق واسعة، والاستئصال الكامل حول وتحت منطقة الجرح واحتضان الأنسجة في بارافورمالدهيد 4٪ في الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) في 4 درجات مئوية خلال الليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الأنسجة لالسكروز 17٪ في حل برنامج تلفزيوني لمدة ساعة على 24 أخرى في 4 درجات مئوية ثم إزالة حل الزائد عن طريق اللمس بعناية على الأنسجة والمكان في شهر أكتوبر من المجمع وتجميد في -80 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الهيماتوكسيلين ويوزين تلطيخ يمكن استخدامها لتصور بنية الجرح والفجوة الظهارية. Neovasculويمكن تقييم arisation بواسطة تحليلات المناعى لتحديد عدد من الشعيرات الدموية (باستخدام عامل فون ويلبراند). </li></ol>

<ol><li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+skin+wounds%3A+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair%22%5BJournal%5D)">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair. 17, 763-771 (2009).</li>
<li>Sen, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+essentials%3A+let+there+be+oxygen%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regen%22%5BJournal%5D)">Wound healing essentials: let there be oxygen.</a> Wound Repair Regen. 17, 1-18 (2009).</li>
<li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+repair+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453, 314-321 (2008).</li>
<li>Lindblad, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+for+selecting+the+correct+animal+model+for+dermal+wound-healing+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomater.+Sci.+Polym.+Ed%22%5BJournal%5D)">Considerations for selecting the correct animal model for dermal wound-healing studies.</a> J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 19, 1087-1096 (2008).</li>
<li>Grose, R., Werner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound-healing+studies+in+transgenic+and+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Wound-healing studies in transgenic and knockout mice.</a> Mol. Biotechnol. 28, 147-166 (2004).</li>
<li>Reid, R. R., Said, H. K., Mogford, J. E., Mustoe, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+future+of+wound+healing%3A+pursuing+surgical+models+in+transgenic+and+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Surg%22%5BJournal%5D)">The future of wound healing: pursuing surgical models in transgenic and knockout mice.</a> J. Am. Coll. Surg. 199, 578-585 (2004).</li>
<li>Fang, R. C., Mustoe, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+wound+healing%3A+utility+in+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomater.+Sci.+Polym.+Ed%22%5BJournal%5D)">Animal models of wound healing: utility in transgenic mice.</a> J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 19, 989-1005 (2008).</li>
<li>Wong, V. W., Sorkin, M., Glotzbach, J. P., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+approaches+to+create+murine+models+of+human+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Surgical approaches to create murine models of human wound healing.</a> J. Biomed. Biotechnol. 2011, 969618(2011).</li>
<li>Galiano, R. D., Michaels, J. t, Dobryansky, M., Levine, J. P., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+and+reproducible+murine+model+of+excisional+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair%22%5BJournal%5D)">Quantitative and reproducible murine model of excisional wound healing.</a> Wound Repair. 12, 485-492 (2004).</li>
<li>Galiano, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+vascular+endothelial+growth+factor+accelerates+diabetic+wound+healing+through+increased+angiogenesis+and+by+mobilizing+and+recruiting+bone+marrow-derived+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Topical vascular endothelial growth factor accelerates diabetic wound healing through increased angiogenesis and by mobilizing and recruiting bone marrow-derived cells.</a> The American Journal of Pathology. 164, 1935-1947 (2004).</li>
<li>Thangarajah, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+basis+for+impaired+hypoxia-induced+VEGF+expression+in+diabetic+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">The molecular basis for impaired hypoxia-induced VEGF expression in diabetic tissues.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 13505-13510 (2009).</li>
<li>Raza, A., Bayles, C., Biebel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+Bacterial+Growth+and+Moisture+Handling+Properties+of+Transparent+Dressings%3A+3M+Tegaderm+Transparent+Dressing%2C+3M+Tegaderm+HP+Transparent+Dressing%2C+and+Opsite+IV3000+Transparent+Dressing%5BTitle%5D)+AND+%22Smith+and+Nephew+Report%22%5BJournal%5D)">Investigation of Bacterial Growth and Moisture Handling Properties of Transparent Dressings: 3M Tegaderm Transparent Dressing, 3M Tegaderm HP Transparent Dressing, and Opsite IV3000 Transparent Dressing.</a> Smith and Nephew Report. , (1998).</li>
<li>Chung, T. Y., Peplow, P. V., Baxter, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+photobiomodulatory+effects+of+laser+irradiation+on+wound+healing%3A+development+of+an+improved+model+for+dressing+wounds+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Photomed.+Laser+Surg%22%5BJournal%5D)">Testing photobiomodulatory effects of laser irradiation on wound healing: development of an improved model for dressing wounds in mice.</a> Photomed. Laser Surg. 28, 589-596 (2010).</li>
</ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

هذا هو نموذج الفئران التجريبية من التئام الجروح الجلدية. وهناك ميزة هامة من هذا النموذج هو استخدام الجبائر السيليكون لمنع انكماش الجرح بحيث قد تحدث إعادة الاندمال بتشكل النسيج الظهاري وتكوين الأنسجة الجديدة، مما يجعلها مشابهة للعملية التي تحدث في البشر. هذا النموذج هو تنوعا، ويمكن استخدامها لتقييم التئام الجروح في إعدادات كلا الفسيولوجية والمرضية في جسم المريض (على سبيل المثال داء السكري). ويمكن أيضا أن تستخدم نموذج لتقييم التئام الجروح المحتملة أو التداوي الأوعية الدموية...

ضعف التئام الجروح هي المسؤولة عن المضاعفات والوفيات في جميع أنحاء العالم كبيرة، وهذا صحيح بشكل خاص بالنسبة لمن يعانون من داء السكري 1،2. في البشر، والتئام الجروح هو سلسلة متصلة من العمليات، التي يوجد فيها تداخل كبير 3. على الفور تم تهيئتها، عمليات التهابات اصابة التالية. الافراج عن الخلايا الالتهابية العوامل التي تشجع عمليات تكاثر الخلايا، والهجرة والأوعية الدموية. بعد إعادة تشكيل الاندمال بتشكل النسيج الظهاري وأنسجة جديدة هناك مرحلة من إعادة عرض أن يستتبع كلا موت الخلايا المبرمج وإعادة تنظيم البروتينات المصفوفة مثل الكولاجين. تعقيد التئام الجروح لا يمكن تكرارها حاليا في المختبر، وهذا يتطلب استخدام النماذج الحيوانية. حتى الآن، ودراسات التئام الجروح اقتصرت على نماذج حيوانية كبيرة، مثل الخنازير، للتأكد من أن عمليات الشفاء متكافئين وقابلة للمقارنة إلى البشر. ومع ذلك، باستخدام أنيما كبيرةيمكن ليرة سورية لمثل هذه الدراسات يكون من الصعب منزل وليست دائما عملية 4. الماوس المختبر يمثل نموذج حيواني الاقتصادية التي يمكن بسهولة التلاعب بها وراثيا لتحقيق الآلية 5-7. ومع ذلك، الجروح تلتئم بشكل مختلف الفئران إلى الإنسان و، ويرجع ذلك في المقام الأول إلى عملية انكماش 8. هذا هو في جزء منه، بسبب وجود طبقة تحت الجلد العضلات المخططة واسعة تسمى السبلة العضلية التي هي غائبة إلى حد كبير في البشر. في الفئران، هذه الطبقة العضلات يسمح للجلد على التحرك بشكل مستقل من عضلات أعمق ومسؤولة عن الانكماش السريع من الجلد التالية اصابة. للتغلب على هذا القيد، التئام الجروح الفئران يمكن تكييفها لتكرار التئام الجروح الإنسان عن طريق استخدام جبيرة (الشكل 1) 8،9. في هذا الفيديو ونحن لشرح تجبير نموذج الفئران من شأنها أن تزيل الجرح انكماش الجرح وبشكل وثيق يقارب العمليات البشرية من إعادة epithelializaنشوئها وتشكيل أنسجة جديدة. في هذا النموذج يتم إنشاء اثنين من الختان كامل سمك التي تشمل السبلة العضلية على ظهر، واحدة على كل جانب من خط الوسط من الماوس. يتم وضع جبيرة سيليكون حول الجرح بمساعدة من مادة لاصقة ثم حصل على جبيرة مع خيوط متقطعة. كل الماوس بمثابة ايقاعه، مع جرح واحد يتلقون العلاج والسيطرة على السيارة الأخرى، مما يؤدي إلى خفض أعداد الحيوانات. بعد التطبيقات الموضعية، يتم تطبيق تضميد الانسداد شفافة. يمكن إزالة الضمادة عند الحاجة لمزيد من التطبيقات الموضعية و / أو قياس من منطقة الجرح 10،11. في يمكن تقييم الانتهاء من التجارب، وإغلاق الجرح، والهندسة المعمارية المورفولوجية ودرجة اتساع الأوعية الدموية التي كتبها المناعية. هذه اقتصادية وسهلة لأداء نموذج يمكن أيضا أن تستخدم لتقييم التئام الجروح في سياق داء السكري أو pathophysiologies الأخرى.

<table><tbody><tr><td>صفائح سيليكون بالضغط على الختم بسمك 0.5 مم</td><td>Invitrogen</td><td>P18178</td><td>مقطعة إلى "دونات" بقطر خارجي 1 سم ، قطر داخلي 0.5 سم</td></tr><tr><td>لكمة خزعة 5 مم</td><td>Steifel</td><td>BC-B1-0500</td><td>لتحديد منطقة الجرح المراد استئصالها</td></tr><tr><td>مقص فاناس 8.5 سم 501232</td> أدوات <td>الدقة العالمية </td><td></td><td>المنحنية لشق الجرح والاستئصال</td></tr><tr><td>دومونتي #7b ملقط ، 11 سم</td><td>World Precision Instruments</td><td>501302</td><td>للإمساك بالجلد عند إنشاء شق واستئصال الجلد </td></tr><tr><td>ملقط Graefe ، مسننة 10 سم</td><td>World Precision Instruments</td><td>14142</td><td>للمساعدة في ربط جبيرة السيليكون بالجلد</td></tr><tr><td>حامل إبرة ، فكوك ناعمة ، منحني ، 12.5 سم</td> World <td>Precision Instruments</td><td>14132</td><td></td></tr><tr><td>ملقط ماليس ، ناعم ، مستقيم ، 12 سم</td><td>Codman and Shurtleff، Inc (J & امبير; ي)</td> <td>80-1500</td><td>لخياطة حلقات السيليكون على الجلد</td></tr><tr><td>مسطرة ، 0.5 مم تدرج</td><td>n / a</td><td></td><td></td></tr><tr><td>الفرجار 0.25 مم تدرج</td><td>Duckworth و Kent</td><td>9-653</td><td>لقياس منطقة الجرح</td></tr><tr><td>Opsite فيلم لاصق شفاف FlexiFix. 10 سم × 1 م</td><td>سميث & أمبير ابن أخ</td><td>66030570</td><td></td></tr><tr><td>ريماديل (كاربروفين)</td><td>فايزر</td><td>462986</td><td></td></tr></tbody></table>

نموذج الفئران من التئام الجروح

Murine Model of Wound Healing

التئام الجروح وإصلاح هي العمليات البيولوجية الأكثر تعقيدا التي تحدث في حياة الإنسان. بعد الإصابة، والمسارات البيولوجية متعددة تصبح تفعيلها. ضعف التئام الجروح، والذي يحدث في مرضى السكري على سبيل المثال، يمكن أن يؤدي إلى نتائج سلبية خطيرة مثل بتر. ،، وهناك بالتالي زيادة قوة دافعة لتطوير وكلاء الرواية التي تعزز إصلاح الجرح. وقد تم اختبار هذه تقتصر على النماذج الحيوانية الكبيرة مثل الخنازير، التي غالبا ما تكون غير عملية. وتمثل الفئران النموذج المثالي قبل السريرية، كما أنها اقتصادية وقابلة للتلاعب الجيني، والذي يسمح للتحقيق الآلية. ومع ذلك، التئام الجروح في ماوس تختلف اختلافا جوهريا لأنه من البشر كما يحدث في المقام الأول عن طريق الانكماش. لدينا نموذج الفئران يتغلب على هذا من خلال دمج جبيرة حول الجرح. بواسطة جبيرة الجرح، عملية الإصلاح ومن ثم تعتمد على الاندمال بتشكل النسيج الظهاري، وانتشار الخلايا والأوعية الدموية، والتي تعكس عن كثبالعمليات البيولوجية من التئام الجروح الإنسان. في حين تتطلب الاتساق والرعاية، وهذا نموذج الفئران لا تنطوي على التقنيات الجراحية المعقدة ويسمح للاختبار قوية من وكلاء الواعدة التي قد، على سبيل المثال، وتعزيز الأوعية الدموية أو تمنع الالتهابات. وعلاوة على ذلك، كل الماوس بمثابة ايقاعه كما يتم إعداد اثنين من الجروح، وتمكن من تطبيق كل من مجمع الاختبار والسيطرة على السيارة في نفس الحيوان. في الختام، علينا أن نظهر، ونموذج العملية سهلة التعلم، وقوية من التئام الجروح، والذي هو مشابه لذلك من البشر.

يتم تحديد منحنى إغلاق الجرح عن طريق حساب متوسط ​​قطرها من الجرح ويعبر عن النتائج كنسبة مئوية، أي 100 - (يوم 0 قطر / يوم القطر X). في هذه التجربة تم تطبيقها على مركب علاجي (أو السيطرة على السيارة) يوميا على الجرح. مجمع العلاجية إغلاق الجرح تسارع إلى حد كبير (الشكل 3). ومن المهم أن نلاحظ أن الجبائر يجب أن يحتفظ به لمدة التجربة، كما إزالة الشظايا سيؤدي إلى انكماش الجرح السريع (الشكل 2R) وتتباعد عن النمط من التئام الجروح التي لوحظت في البشر. ...

نموذج الفئران من التئام الجروح الجلدية التي يمكن استخدامها لتقييم المركبات العلاجية في إعدادات الفسيولوجية والمرضية في جسم المريض.

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو إحداث جرح، يتم تثبيته بجبيرة لمنع الانكماش وتعزيز تكاثر الخلايا الظهارية وتكوين الأوعية الدموية. يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق تحضير ظهر القدم وإحداث جرحين استئصاليين بكامل السماكة على جانبي الخط المتوسط. بعد ذلك، توضع جبيرة فوق الجرح وتُثبت بالغرز الجراحية في مكانها.يتم بعد ذلك قياس الجرح وتطبيق العلاجات. وأخيرًا، يُوضع ضماد سادّ فوق الجرح ويُترك الفأر للتعافي. وفي نهاية المطاف، يُستخدم نموذج التئام جرح الاستئصال الجلدي لتقييم الجرح، وعملية التظهير، والعمليات المرتبطة بها، بما في ذلك التكاثر وتكون الأوعية الدموية.تتمثل الميزة الرئيسية لهذه التقنية مقارنة بالطرق الأخرى في منع انكماش الجرح، مما يحفز تكاثر الخلايا الطلائية وتكوين الأوعية الدموية، وهو ما يحاكي عملية التئام الجروح بشكل أكثر دقة. وتعد هذه الطريقة مفيدة بشكل خاص في البشر لتقييم فعالية المركبات العلاجية، وبما أن كل فأر يعمل كعينة ضابطة لنفسه، فإن ذلك يقلل من عدد الحيوانات المطلوبة للدراسة.ابدأ بتجهيز الجبائر والضمادات السادة لصنع جبيرة. أولاً، ارسم دائرة بقطر 10 millimeter على ورقة من السيليكون، ثم استخدم المقص أو مخرز الخزعة لإنشاء أقراص سيليكون. بعد ذلك، ضع مخرز خزعة بقطر five millimeter في منتصف القرص الذي قطره 10 millimeter، واضغط بقوة لإنشاء حلقة تشبه الحلقة التي ستُستخدم كجبيرة.قم بتجهيز ضمادات دائرية من ذات الحجم باستخدام ضمادة سادة شفافة مثل ops site. للبدء، تحقق من عمق التخدير المناسب في فأر مخدر. بعد إزالة جميع الشعر من المنطقة الجراحية، قم بتنظيف الجلد عبر تطبيقات متكررة من Betadine والكحول.عند الاستعداد، استخدم خرامة خزعة معقمة بقطر 4 مليمتر لرسم مخطط لنمطين دائريين على جانبي الخط الناصف للفأر عند مستوى الكتف. بعد ذلك، استخدم ملقطاً مسنناً لرفع الجلد في منتصف المخطط، ومقصات قزحية لإحداث الجرح. تأكد من القطع عبر النسيج تحت الجلد، بما في ذلك الـ panus osis.قم باستئصال النسيج من كلا الجانبين للكشف عن جرحين دائريين. أزل الغطاء الواقي البلاستيكي من كل جانب من جبيرة السيليكون وضع لاصق السيانوأكريلات على أحد الجانبين.ضع الجبيرة في منتصف الجرح وثبتها في مكانها باستخدام غرز نايلون متقطعة مقاس 6-0. كرر عملية التجبير على الجرح الآخر. في هذه المرحلة، يمكن تطبيق مركب علاجي على أحد الجروح بينما يتم استخدام الجرح الآخر.بالنسبة لمجموعة التحكم (vehicle control)، ضع مسطرة أسفل الجبائر والتقط صورة مجهرية. قم بتغطية الجرح بإحدى قطع الضمادات الدائرية التي تم تحضيرها مسبقاً. بعد إعطاء مسكن للألم، اترك الحيوان ليتعافى في قفص مدفأ.تتم مراقبة الحيوانات مرتين يومياً لرصد مظاهر الألم وفقدان الوزن. ولقياس الجرح، يتم تخدير الحيوان كما هو موضح سابقاً، ثم إزالة الضمادة السادة برفق باستخدام الملقط. استخدم الفرجار الجراحي لقياس قطر الجرح في نقاط متعددة للحصول على متوسط القياس، والتقط صورة مجهرية للرجوع إليها لاحقاً.في هذه المرحلة، يمكن تقييم تروية الدم لدى الحيوان. باستخدام جهاز التصوير بالدوبلر الليزري، ضع ضمادة سادة شفافة ونظيفة على الجرح وحافظ على دفء الحيوان حتى يتعافى تماماً. من المهم ملاحظة أنه إذا لم يتم تثبيت الجبائر بشكل صحيح، فإن الجرح سينكمش بسهولة بعد القتل الرحيم بجرعة زائدة من المخدر؛ لذا استخدم ملقطاً ونصل مشرط لإزالة الغرز وقشر الجبيرة بعناية بعيداً عن الجروح.استخدم مقصات القزحية لإجراء استئصال واسع وكامل حول منطقة الجرح وتحتها. وبمجرد إزالة النسيج، يتم تثبيته وفقاً للإجراءات القياسية. يمكن استخدام صبغ الهيماتوكسيلين والإيوسين لتصوير بنية الجرح والفجوة الظهارية.بالإضافة إلى ذلك، يمكن تقييم تكوين الأوعية الدموية الجديدة عن طريق التحليلات الكيميائية النسيجية المناعية لتحديد عدد الشعيرات الدموية. ويتم تحديد منحنى إغلاق الجرح عن طريق حساب متوسط قطر الجرح والتعبير عن النتائج كنسبة مئوية. في هذا المثال، أدى المركب العلاجي إلى تسريع إغلاق الجرح بشكل كبير مقارنة بمجموعات الضبط.بمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن تنفيذها في غضون 30 دقيقة إذا أُجريت بشكل صحيح. وأثناء محاولة تطبيق هذا الإجراء، من المهم تثبيت الجبيرة بإحكام باستخدام غرز موزعة بالتساوي للحفاظ على الاتساق بين التجارب.

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

في هذا الفيديو ، نصف إجراء لعزل سرير الجرح الناجم عن القولون في نقطة زمنية مناسبة للتحليل الجزيئي التفصيلي. يساعد هذا التحليل على فهم عملية التئام الجروح في الحالات الالتهابية في الجهاز الهضمي.

نموذج جرح الفئران الموجه بالمنظار القولي: طريقة لعزل سرير الجرح الناجم عن الخزعة من القولون لفهم عملية الشفاء

يصف لنا غير الغازية في فيفو التصوير البروتوكول تكون مبسطة وفعالة من حيث التكلفة، الاستفادة من L-012، تشيميلومينيسسينت لومينول النظير، تصور والتحديد الكمي للأنواع الأكسجين التفاعلية (روس) التي تم إنشاؤها في نموذج ماوس استئصالية الجرح.

في فيفو تصوير للأنواع الأكسجين التفاعلية في الفاري الجرح النموذجي

هنا، نقدم بروتوكول احتساء الصفر في المختبر باستخدام الخلايا الليفية الأولية ولإجراء اختبار التئام الجروح في الجلد في الجسم الحي في الفئران. كلا الاختبارين هما طريقتان مباشرتان لتقييم الجروح في المختبر وفي الجسم الحي.

فحص الهجرة الصفر وغرفة الجلد السمرة لتحليل في المختبر وفي الجسم الحي للشفاء الجروح

هنا، يتم وصف نموذجين التئام الجروح المورين، واحد يهدف إلى تقييم الاستجابات التئام الجروح الخلوية والسيتوكين والآخر لتحديد معدل إغلاق الجروح. ويمكن استخدام هذه الأساليب مع نماذج الأمراض المعقدة مثل مرض السكري لتحديد آليات جوانب مختلفة من الشفاء الجروح الفقراء.

تقييم التئام الجروح الحادة باستخدام دورسال تحت الجلد بوليفينيل الكحول الإسفنج زرع واستئصال الذيل نماذج الجرح الجلد.

وكان الهدف من هذه الدراسة لتطوير نموذج مورين من حرق التئام الجروح. تم احراق حراري على الجلد الظهري للفئران باستخدام قالب نحاسي محمّد مسبقاً. تم احتراق الأنسجة المحترقة ومضافًا مع ترقيع جلدي تم حصاده من ذيل فأر متبرع مشابه وراثيًا.

نموذج مورين من جرح حرق أعيد بناؤها مع الكسب غير المشروع الجلد الجيني

يصف هذا البروتوكول كيفية توليد الجروح الثنائية ذات السماكة الكاملة في الفئران وكيفية مراقبة الجروح وحصدها وإعدادها لتحليلها. يتضمن وصفاً متعمقاً لكيفية استخدام أقسام النسيج التسلسلية لتحديد عيوب المورفوميات وتحديدها بدقة والكشف عنها.

مورين استئصال الجروح التئام نموذج وتحليل الجروح الفسطولوجي

هنا نظهر تقنية محسنة لتقييم إصلاح الجروح باستخدام الجلد البشري السابق vivo جنبا إلى جنب مع نهج تلطيخ جبل كامل. توفر هذه المنهجية منصة ما قبل السريرية لتقييم علاجات الجروح المحتملة.

الإنسان السابق الجسم الحي الجرح نموذج ونهج تلطيخ جبل كامل لتقييم بدقة إصلاح الجلد

تقدم هذه الدراسة تقنيتين تجريبيتين حاسمتين: بناء نموذج جرح الفئران لتقييم إغلاق الجرح وإعداد معلقات أحادية الخلية من جلد الفئران للحفاظ على حيوية الخلية.

نماذج جروح الفئران وتحضير معلقات الخلايا المفردة

يتم تقديم بروتوكول مبسط لإنشاء نموذج التئام جروح الحروق في الفئران باستخدام جهاز تسخين رقمي. تسهل المواقع التجريبية الشبيهة برقعة الشطرنج التي تم إنشاؤها على الجلد مزيدا من التحليل الوظيفي لمقايسة التئام الجروح.

نموذج التئام الجروح الحروق الشبيه برقعة الشطرنج للفئران على أساس جهاز التسخين الرقمي

تمثل الجروح تحديا صحيا عالميا. طورت هذه الدراسة كشك صور موحد يستخدم المخطط الرقمي لتقليل تقلب قياس الجرح. كشفت مراقبة الجروح في الفئران على مدى 14 يوما عن زيادة أولية في مساحة الجرح ومحيطه ، تليها الإغلاق التدريجي. قد تساعد هذه المنهجية في تقييم حركية إغلاق الجرح في النماذج قبل السريرية.

المخطط الرقمي لتقييم حركية إغلاق الجرح في نموذج الماوس

يوصف نموذج جرح جلد الجرذ الذي يتيح تقييم عوامل علاجية مختلفة تحت ظروف فسيولوجية أو مرضية عبر مراحل مختلفة من عملية الشفاء. علاوة على ذلك، تم تفصيل بروتوكول لإجراء التخطيطات اليدوية لمراقبة معدل انقباض الجرح طوال فترة إصلاح الأنسجة.

نموذج جراحي لجروح جلدية للفئران: نهج لدراسات شفاء الجروح وتقييم المواد الحيوية

تعلم نموذج التئام الجروح في الفئران باستخدام جبيرة السيليكون لمنع الانكماش وتعزيز التسرّي الطلائي والتكاثر الخلوي والأوعية الدموية. يُمكّن هذا النموذج الباحثين من اختبار العلاجات بشكل قوي وموثوق.

نموذج الفئران من التئام الجروح

استكشف المزيد من الفيديوهات