March 21st, 2013
وتصف هذه الورقة طريقة striaghforward وكفاءة تنبيب الفئران لقياس وظائف الرئة أو تقطير الرئوي، التي تسمح للفئران لاسترداد ويكون درس في أوقات لاحقة. الإجراء ينطوي على مصدر الضوء غير مكلفة الالياف البصرية الذي ينير مباشرة القصبة الهوائية.
الهدف العام من هذا الإجراء هو تنبيب الفأر للسماح إما بالتهوية الميكانيكية أو تركيب السوائل. يتم تحقيق ذلك عن طريق تجميع القنية ومصدر الضوء أولا. الخطوة الثانية هي تعليق الماوس عموديا بواسطة القواطع العلوية.
بعد التلاعب بالرأس والجسم للسماح بمسار مستقيم للتنبيب ، أدخل مدخل الألياف الضوئية والقنية من خلال الحبال الصوتية. في النهاية ، تتم إزالة الألياف الضوئية ويتم وضع الماوس الذي يحتوي على قنية في مكانه في وضع ضعيف للتهوية أو التركيب. حسنا ، سنعرض اليوم إجراء بسيطا لتنبيب رئة الفأر.
التصور مهم لأنه غالبا ما يكون وضع الماوس خطوة حاسمة من حيث إدخال القنية ، وبالتالي مع القليل من الممارسة ، يتطلب الأمر القليل من الممارسة. يجب أن يكون من الممكن لأي شخص القيام بذلك بشكل متكرر في وقت قصير نسبيا لإثبات الإجراء اليوم هو الدكتور ساندي دوس ، وهو عضو هيئة تدريس مبتدئ في قسم الطب الرئوي وكلية الطب. الخطوة الأولى هي الاستعداد.
تحضير القنية للفئران البالغة ، يتم استخدام قسطرة IV بطول واحد إلى 1.5 بوصة ، قياس 20. بعد ذلك ، قم بإعداد كابل الألياف الضوئية عن طريق قطع كابل بصري بطول 0.5 ملم لتنعيم الحافة. بعد القطع ، أمسك الألياف في النهاية وقم بعمل دوائر صغيرة بحيث تلمس الأطراف قطعة من ورق الصنفرة 1000 حصى.
يتم إدخال الطرف الآخر في سدادة مطاطية من السيليكون بحجم لتناسب فتحة مصدر الضوء. أولا ، ادفع من خلال إبرة قياس 18. بعد ذلك ، أدخل الألياف الضوئية من خلال تجويف الإبرة واسحب الإبرة.
ثم يتم توصيل السدادة المطاطية بمصدر ضوء هالوجين بقوة 150 واط. بعد ذلك ، أدخل كابل الألياف الضوئية من خلال قطعة قصيرة من أنابيب مطاط السيليكون. قم بتأمين الأنبوب في مكانه مع السماح بضبط كابل الألياف الضوئية.
بمجرد وضعه في مكانه ، أدخل أنبوب السيليكون بإحكام في نهاية إغراء القنية. اضبط موضع كابل الألياف الضوئية بحيث يمتد عبر القنية وحوالي أربعة ملليمترات أمام الحافة. بمجرد تحضير كل شيء ، ضع فأرا مخدرا على دعامة رأسية عن طريق تعليق بعناية بواسطة القواطع العلوية.
بمجرد تثبيته ، برفق شديد ، اسحب اللسان وامسكه بالإبهام والسبابة. ضع الإصبع الأوسط بين الرقبة وجر الدعم البلاستيكي على اللسان باستخدام السهر. يستخدم الإصبع والإبهام لفتح الفم وتقويم مسار التنبيب.
يتم ضبط زاوية الرأس بالإصبع الأوسط خلف الرقبة كما هو موضح هنا. بعد ذلك ، تصور الحبال الصوتية. إذا لم تكن الحبال مرئية ، فاسحب اللسان برفق بقوة أكبر باستخدام الإصبع الأوسط كدعم.
بمجرد تصورها ، استخدم كابل الألياف الضوئية كمصدر للضوء ومدخل وادفعه عبر الحبال الصوتية. أحد المؤشرات على وجود القنية في القصبة الهوائية هو أن الفأر قد يلهث عند إدخال القنية لأول مرة. بمجرد إدخالها ، قم بتقديم القنية بحوالي خمسة ملليمترات علاوة على ذلك ، ثم احرص على عدم تحريك القنية ، واسحب كابل الألياف الضوئية ، واستلق الماوس لأسفل ، وقم بتأمين القنية بقطعة من الشريط اللاصق وادعم محور القنية على قطعة من طين النمذجة.
يمكن استخدام مرآة أسنان صغيرة محفوظة في الفريزر للتأكد من أن القنية في القصبة الهوائية وليس المريء. ضع المرآة أمام محور الإغراء للقسطرة. إذا كانت القسطرة في الموضع الصحيح ، فإن التنفس الزفير سيشكل تكاثفا على المرآة.
إذا تم إجراء التنبيب فقط لتركيب عوامل الهباء الجوي في الرئة ، فيمكن القيام بذلك أثناء استلقاء الفأر. ومع ذلك ، في هذا الوضع ، تتم التركيبات السائلة بشكل أكثر كفاءة بينما لا يزال الماوس معلقا في الوضع الرأسي ، متبوعا بالإزالة الفورية للقنية لقياس وظائف الرئة. ثم يتم توصيل الفأر المخدر بالتنبيب بجهاز التنفس الصناعي كما هو موضح هنا.
يجب إجراء إعدادات جهاز التنفس الصناعي قبل بدء التنبيب ، لذلك لن يكون هناك تأخير في التهوية. يظهر سجل لضغط التهوية وحجمها لهذا الفأر التنبيب. قمنا بتقييم قدرة الطريقة على الحصول على قياسات قابلة للتكرار لمقاومة مجرى الهواء على مدى خمسة أسابيع.
تظهر البيانات الواردة في هذا الرسم البياني أنه لا يوجد تأثير لإجراء قياسات متكررة لأن مقاومة خط الأساس تظل ثابتة نسبيا. في كل من الفئران الأربعة التي تمت دراستها على فترات أسبوعية ، قمنا بتقييم ضيق الختم بين القصبة الهوائية وقنية التنبيب عن طريق حقن جرعات هوائية في الرئتين بعد التضحية بالفأر. على الرغم من أنه قد يكون هناك تسرب بطيء جدا بعد الإجهاد ، واستعادة الاسترخاء ، إلا أن تسربات الضغط تبدو ضئيلة.
أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم جدا توخي الحذر أثناء إزالة الماوس من الحامل الداعم لأنه من السهل جدا سحب القنية عن طريق الخطأ.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
تصف هذه الورقة طريقة بسيطة وفعالة لتبخير الفئران لقياسات وظائف الرئة أو إدخال السوائل في الرئة. تتيح هذه العملية للفئران التعافي ودراسة لاحقة، باستخدام مصدر ضوء ليفي بصري رخيص الثمن يضيء القصبة الهوائية مباشرة.
Mouse lung intubation enables longitudinal pulmonary studies with reduced animal numbers and increased statistical power by using each animal as its own control. This method supports target validation and mechanistic de-risking in respiratory disease models by allowing repeated functional assessments over time. The fiberoptic-assisted technique lowers technical barriers, making longitudinal designs accessible to more laboratories.
The method fits within the discovery continuum from early target validation through preclinical efficacy testing, particularly for respiratory indications where longitudinal lung function is a key biomarker.