DNBS / TNBS التهاب القولون نماذج: توفير نظرة ثاقبة مرض التهاب الأمعاء وآثار الدهون الغذائية

الهدف العام من هذا الإجراء هو تقديم طريقة بديلة وغير مكلفة لدراسة مرض التهاب الأمعاء أو مرض التهاب الأمعاء باستخدام DY نيترو البنزين وحمض النطاقات أو DNBS. يتم تحقيق ذلك عن طريق إدارة DNBS لأول مرة داخل المستقيم عن طريق الإدخال اللطيف في فتحة الشرج. في الخطوة الثانية ، يتم الحصول على أقسام الأنسجة في الأمعاء الغليظة للفحص النسيجي ولتقييم نشاط النخاع بيروكسيداز للأنسجة التي تواجه تحدي DNBS ، وفي النهاية يمكن تقييم آثار الزيوت الغذائية على فقدان الوزن والتهاب القولون بالطرق العيانية والمجهرة.

الميزة الرئيسية لهذه المسألة على طريقة كبريتات الصوديوم dextron الحالية هي أن طريقة DNBS سهلة التنفيذ وأقل تكلفة وقابلة للتكرار بدرجة كبيرة. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال أبحاث مرض التهاب الأمعاء ، مثل ما هي أدوار الإجهاد والاكتئاب في تكرار مرض التهاب الأمعاء ، أو ما هي الآليات الأساسية في إصابة الأمعاء وإصلاحها لتركيب DNBS في الفئران في المستقيم ، ابدأ بربط حقنة سعة ملليلتر واحد بإبرة قياس 19. مجهزة بقسطرة البولي إيثيلين 50 ثم شفط DNBS المحضرة حديثا في القسطرة.

بعد ذلك ، ضع الجل المسيل للدموع على فأر مخدر واضغط برفق بأطراف الأصابع على الطرف الخلفي للحيوان لإزالة أي براز موجود في القولون البعيد. الآن قم بحقن كمية صغيرة من محلول DNBS لتليين القولون لتسهيل إدخاله أثناء إدخال القسطرة برفق داخل المستقيم حوالي ثلاثة إلى أربعة سنتيمترات. بمجرد وضع القسطرة في مكانها ، قم بحقن 100 ميكرولتر من DNBS أو حجم متساو من 50٪ من الإيثانول لحيوانات التحكم.

ثم ضع رأس لأسفل لمدة 90 ثانية لتجنب فقدان الكواشف. بعد إعطاء DNBS ، قم بإطعام 8٪ ماء سكروز في محلول ملحي 0.2٪ لمنع الجفاف خلال الأسبوع الأول. مراقبة يوميا بعناية لفقدان الوزن أو الجفاف أو الضيق طوال مدة التجربة التي تعني في النقطة الزمنية المطلوبة.

بعد تحدي DNBS ، افتح تجويف البطن للحيوان القتل رحيم وقم بإزالة الأمعاء الغليظة بأكملها. ثم افتح الأمعاء طوليا. يجب ملاحظة القرحة المخاطية العيانية على بعد حوالي سنتيمترين إلى ثلاثة سنتيمترات قريبة من الطرف البعيد للقولون.

اجمع أقسام 0.5 سم قريبة من موقع الضرر العياني الأقصى في التجارب وأجزاء القولون من المواقع التشريحية المقابلة من التحكم. ثم قم بتجميد 0.5 سم من قسم واحد من عنصر تحكم واحد و 1D NBS المعالج في النيتروجين السائل لتقييم نشاط النخاع بيروكسيداز وإصلاح الأقسام الأخرى في فورمين مخزن محايد بنسبة 10٪ بين عشية وضحاها أو تحليل نسيجي. في صباح اليوم التالي ، اغسل المناديل الثابتة للفورمالين بنسبة 70٪ من الإيثانول وضعها في كاسيت لإرسالها إلى منشأة الأنسجة ليتم تضمينها في البارافين وتلطيخها بالهيماتين والإوين للتسجيل النسيجي.

ثم قم بتسجيل ثلاثة أقسام على الأقل من كل تحت المجهر الضوئي لتحديد درجات الضرر النسيجي لكل مجموعة لفحص نشاط النخاع بيروكسيداز للأنسجة التي تحدى DNBS. أولا ، قم بتجانس الأنسجة المجمدة والأنسجة التجريبية في مخزن تجانس النخاع بيروكسيداز لإعطاء جزء قولون 50 ملليغرام لكل مليلتر من تعليق المخزن المؤقت للتجانس. ثم قم بتقسيم المحلول المتجانس إلى أجزاء مليلتر واحد وقم بطردها لمدة دقيقتين عند 10 ، 000 مرة جم وأربع درجات مئوية.

بعد ذلك ، انقل 100 ميكرولتر من كل كوت إلى كوفيت فردي وأضف 2.9 مل من PBS مكملا بخلط IDE وثنائي هيدروكلوريد وبيروكسيد الهيدروجين بقوة. أخيرا ، قم بقياس معدل الامتصاص باستخدام مقياس الطيف الضوئي عند 460 نانومتر. بعد التحدي داخل المستقيم مع DNBS كما هو موضح للتو.

لوحظ فقدان كبير للوزن بمقدار 48 ساعة في الفئران المكملة بزيت السمك أو زيت الكانولا ، وبحلول 72 ساعة في الفئران المكملة بزيت القرطم. يحدث الحد الأقصى لفقدان الوزن الذي لوحظ في 48 ساعة في زيت السمك ، والفئران المكملة ، وبحلول 72 ساعة في الفئران. مكمل بزيت الكانولا أو زيت القرطم.

استؤنفت زيادة الوزن بعد 72 ساعة وقبل خمسة أيام من إعطاء DNBS ، أظهرت المجموعات المعالجة بزيت السمك وزيت القرطم أوزان جسم مماثلة لقيمها الأساسية. اكتسبت الفئران الضابطة المكملة بالزيوت الغذائية وتحدت الإيثانول داخل المستقيم وزنا مطردة خلال فترة الدراسة التي استمرت خمسة أيام. يمكن أن يكون الضرر المعوي الناجم عن DNBS واسع الانتشار.

ومع ذلك ، فإن منطقة الضرر الأقصى موضعية بشكل عام في ستة سنتيمترات بعيدة من القولون في الفئران وثلاثة سنتيمترات بعيدة في الفئران. عند التقييم النسيجي الدقيق ، لوحظت إصابة ظهارية واسعة النطاق ، بما في ذلك تكوين القرحة ، وتسلل العدلات والخلايا الليمفاوية ، واستنفاد المخاط ، والوذمة. على الرغم من أن هذه العلامات النسيجية للالتهاب وتلف الأنسجة واضحة في جميع المجموعات الثلاث المكملة بالزيوت الغذائية عند التحدي باستخدام DNBS ، إلا أن الضرر الأكثر خطورة يظهر في مجموعة زيت القرطم تليها مجموعة زيت الكانولا.

في حين أن الفئران في مجموعة زيت السمك تظهر الحد الأدنى من الإصابة الظهارية وتسلل محدود للخلايا الالتهابية في الغشاء المخاطي. يمكن قياس الاختلافات في الضرر النسيجي بين العينات للسماح بمقارنة أفضل بين المجموعات. يوضح الرسم البياني درجات الضرر النسيجي لمجموعات الزيوت الغذائية الثلاث أثناء التهاب القولون DNBS.

كما لوحظ في القسمين الملطخين h و e ، تظهر المجموعة المكملة بزيت القرطم أكبر قدر من الضرر تليها مجموعة زيت الكانولا. في حين أن مجموعة زيت السمك تظهر أقل قدر من الضرر ، يمكن فحص مدى تسلل الخلايا الالتهابية خاصة للعدلات عن طريق إجراء فحص نشاط بيروكسيداز النخاع. كما هو متوقع من درجات الضرر النسيجي.

يكشف تقييم نشاط النخاع بيروكسيداز في القولون الفئران في اليوم الخامس بعد التعرض ل DNBS عن زيادة في النشاط في جميع المجموعات الثلاث التي لوحظ فيها أكبر نشاط مايلو بيروكسيداز لوحظ في مجموعة زيت القرطم ، تليها مجموعة زيت الكانولا ومجموعة زيت السمك. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر تخدير الفئران قليلا وتحسين جرعات DNBS بعد تطويرها. مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال مرض التهاب الأمعاء لاستكشاف الآليات التي تتحكم في التهاب الأمعاء في النماذج الحيوانية لمرض التهاب الأمعاء.

لا تنس أن العمل مع DNBS يمكن أن يكون خطيرا للغاية ، لذلك يجب دائما ارتداء الاحتياطات مثل الملابس الواقية والقفازات والنظارات الواقية وعلاجات الوجه أثناء تحضير المحلول.